واکنش اتصال مکمل تست تثبیت کمپلمان (CFR) یک تست سرولوژیکی پیچیده دو مرحله ای است. واکنش های پیچیده تشخیص ایمنی. واکنش تثبیت کمپلمان (RSC). پدیده لاک خون. مراحل، تکنیک واکنش تثبیت مکمل

یک مزیت خاص CSC این است که ماهیت آنتی ژن درگیر در آن (جسمی یا محلول) مهم نیست، زیرا مکمل به قطعه Fc هر آنتی بادی مربوط به IgG و IgM بدون توجه به ویژگی آنتی بادی آن متصل می شود. علاوه بر این، CSC بسیار حساس است: به شما امکان می دهد مقدار آنتی بادی ها را 10 برابر کمتر از مثلاً در واکنش بارش شناسایی کنید. RSC در سال 1901 توسط J. Bordet و O. Zhang پیشنهاد شد. این بر اساس دو ویژگی مکمل است:

1) توانایی اتصال به مجموعه "آنتی ژن + آنتی بادی"؛

2) لیز گلبول های قرمز که برای به دست آوردن سرم همولیتیک استفاده می شود.

یک مکمل استاندارد به این سیستم اضافه شده است. منبع آن آب پنیر تازه یا خشک شده خوکچه هندی است. مخلوط به مدت یک ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه می شود. اگر آنتی‌بادی‌هایی در سرم آزمایش وجود داشته باشد، با آنتی‌ژن اضافه‌شده برهم‌کنش می‌کنند و کمپلکس‌های آنتی‌ژن + آنتی‌بادی به‌دست‌آمده، مکمل اضافه‌شده را متصل می‌کنند. اگر آنتی بادی در سرم وجود نداشته باشد، تشکیل کمپلکس آنتی ژن + آنتی بادی رخ نمی دهد و مکمل آزاد می ماند.

معمولاً هیچ تظاهرات قابل مشاهده ای از تثبیت کمپلمان در این مرحله از واکنش وجود ندارد. بنابراین، برای روشن شدن این سوال که آیا تثبیت کمپلمان رخ داده است یا خیر، یک سیستم نشانگر دوم (سرم همولیتیک غیرفعال + گلبول های قرمز قوچ) اضافه می شود و مخلوط تمام اجزای CSC دوباره در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30-60 دقیقه انکوبه می شود. پس از آن نتایج واکنش ارزیابی می شود. با استفاده از یک گوشی هوشمند (به عنوان مثال، چنین)، می توانید زمان دقیق واکنش را محاسبه کنید. اگر مکمل در مرحله اول، در سیستم تشخیصی، یعنی آنتی‌بادی‌هایی در سرم بیمار وجود داشته باشد، و مکمل توسط کمپلکس «آنتی‌بادی + آنتی‌ژن» متصل شده باشد، لیز گلبول‌های قرمز وجود نخواهد داشت - RSC مثبت است. : مایع بی رنگ است، رسوب در انتهای گلبول های قرمز لوله آزمایش است.

اگر آنتی بادی خاصی در سرم وجود نداشته باشد و اتصال کمپلمان در سیستم تشخیصی اتفاق نیفتد، یعنی RSK منفی باشد، مکمل مصرف نشده در سیستم تشخیصی به مجموعه "گلبول قرمز + آنتی بادی" سیستم نشانگر متصل می شود و همولیز رخ می دهد. : در لوله آزمایش "خون لاک"، رسوب گلبول قرمز وجود ندارد. شدت CSC با یک سیستم چهار متقاطع، بسته به میزان تاخیر همولیز و وجود رسوب گلبول های قرمز، ارزیابی می شود. این واکنش با کنترل های مناسب همراه است: کنترل سرم (بدون آنتی ژن) و کنترل آنتی ژن (بدون سرم)، زیرا برخی از سرم ها و برخی آنتی ژن ها دارای اثرات ضد مکمل هستند. قبل از تنظیم RSK، تمام اجزای درگیر در آن، به استثنای سرم یا آنتی ژن مورد مطالعه، به دقت تیتر می شوند.

به ویژه مهم است که دوز دقیق مکمل را وارد واکنش کنید، زیرا کمبود یا بیش از حد آن می تواند منجر به نتایج نادرست شود. تیتر کمپلمان حداقل مقداری است که در حضور دوز کاری سرم همولیتیک، انحلال کامل گلبول های قرمز را تضمین می کند. برای تنظیم آزمایش اصلی، دوز مکمل گرفته می شود که 20-25٪ نسبت به تیتر تعیین شده افزایش یافته است. تیتر سرم همولیتیک حداکثر رقت آن است که در صورت مخلوط شدن با حجم مساوی 10 درصد محلول کمپلمان، دوز مربوطه گلبول های قرمز را در مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد به طور کامل همولیز می کند.

واکنش همولیز غیرمستقیم به عنوان یک روش تسریع شده برای تشخیص آنتی بادی های خاص استفاده می شود. اریتروسیت ها به عنوان حامل آنتی ژن ها استفاده می شوند. در صورت وجود آنتی بادی های اختصاصی در سرم بیمار، گلبول های قرمز حساس در حضور کمپلمان لیز می شوند.

اطلاعات درست را پیدا نکردید؟ مشکلی نیست! از جستجوی سایت در گوشه سمت راست بالا استفاده کنید.

(RSK) - سرول. واکنشی که برای تعیین کمیت Ab و Ag تثبیت کننده مکمل استفاده می شود. اصل CSC این است که یک کمپلکس ایمنی خاص، C اضافه شده به سیستم را به طور کامل یا جزئی جذب می کند. C به عنوان یک شاخص کمی برای اتصال C در نظر گرفته می شود. سیستم همولیتیک،همولیز یک ازدحام نشان دهنده عدم وجود کمپلکس ایمنی در سیستم تشخیصی است (RSK منفی)،تاخیر همولیز - برای حضور کمپلکس ایمنی (RSK مثبت).در RSC از موارد زیر استفاده می شود: 1) حرارت دادن در دمای 57 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه. s-ku، باید تازه باشد، بدون ذرات معلق، سیتوتوکسین، C. در آزمایش، بسته به تیتر تشخیصی RSK در بیماری مشکوک، معمولاً چندین مضرب از 2 رقت s-ki مصرف می کنند. 2) یک تشخیص برای فروش یا به طور ویژه برای RSK تهیه شده است. 3) C در دوز کاری که وقتی با Ag تیتر می شود برابر با تیتر C است و وقتی بدون Ag تیتر می شود 20-25٪ بیشتر از تیتر C است. 4) گلبول های قرمز گوسفند چندین بار با سالین شسته می شوند و یک سوسپانسیون 3٪ تهیه می شود. 5) اسید همولیتیک 3 برابر کمتر از تیتر نشان داده شده در برچسب رقیق می شود. همه 5 جزء در یک حجم (0.5 میلی لیتر یا 0.25 میلی لیتر) گرفته می شوند. تحقیقات به سیستم آزمایشی (تشخیصی) وارد می شود. s-ku، diagnosticum، S. کنترل ها آماده می شوند: s-ki - s-ku، C و محلول نمک (به جای Ag). diagnosticum - diagnosticum، C و محلول نمکی (به جای s-ki)؛ C-C و دو برابر حجم سالین. بدیهی است مثبت - ایمنی استاندارد s-ka، Ag، C؛ بدیهی است منفی - نرمال s-ka، Ar، C. لوله ها را تکان داده و به مدت 45 دقیقه در یک ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار دهید. در همان زمان، یک سیستم همولیتیک با مخلوط کردن حجم مساوی از یک سوسپانسیون 3٪ از گلبول های قرمز گوسفند و همولیتیک s-ki تهیه می شود و برای همان زمان در یک ترموستات انکوبه می شود. پس از ایجاد حساسیت، حجم دو برابری از سیستم همولیتیک (1 میلی لیتر یا 0.5 میلی لیتر) به تمام لوله های آزمایش و کنترل اضافه می شود. تمام لوله ها در یک ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد نگهداری می شوند تا زمانی که همولیز کامل در لوله های کنترل رخ دهد (حدود 30 تا 40 دقیقه). با یک روش کمی تنظیم واکنش، یک رقت یافت می شود، در کروم تاخیر در همولیز حداقل 2+ (تیتر در تحقیق. S-ki) وجود دارد و آن را با تیتر تشخیصی بیماری در حال تشخیص مقایسه کنید. یک روش نیمه کمی با یک رقت s-ki (معمولاً 1:5) امکان تعیین میزان تاخیر در همولیز را با 4+، 3+، 2+ و بر این اساس، شدت واکنش را ارزیابی می کند. . نتایج دقیق تر، یافتن تیتر s-ki نه با 100٪ بلکه با 50٪ همولیز است (نگاه کنید به. تعریف مکمل).گونه‌ای از تنظیم کمی RSK پیشنهاد شده است که در آن یک رقت s-ki گرفته می‌شود، اما چندین دوز C (1؛ 1.5؛ 2؛ 2.5؛ 3؛ 4). همه اجزای دیگر در مقادیر مشابه استفاده می شوند. هنگام ارزیابی این واقعیت را در نظر داشته باشید که دوزهای C بیشتر به مطالعه متصل می شود. s-ka، بیشتر در آن است.

(منبع: واژه نامه اصطلاحات میکروبیولوژی)

ببینید "واکنش تثبیت مکمل" در فرهنگ های دیگر چیست:

واکنش تثبیت مکمل- روش آزمایشگاهی RSK. [واژه نامه انگلیسی-روسی اصطلاحات اساسی در مورد واکسینولوژی و ایمن سازی. سازمان بهداشت جهانی، 2009] موضوعات واکسینولوژی، ایمن سازی مترادف RSK EN تست تثبیت مکمل تستCFTCF ... کتابچه راهنمای مترجم فنی

واکنش پیوند مکمل- واکنش تثبیت مکمل، واکنش RSK، BordeZhangu [به نام Belg. باکتری شناسان J. Bordet و O. Zhangu (O. Gengou)، 1901]، یک واکنش سرولوژیکی بسیار خاص و بسیار حساس بر اساس ویژگی پیچیده ... ... فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی

I تست تثبیت مکمل یک تست سرولوژیکی که برای تعیین آنتی ژن یا آنتی بادی استفاده می شود، بر اساس ارزیابی مصرف (پیوند) کمپلمان توسط کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی، به روش های تحقیق ایمونولوژیک مراجعه کنید. دوم…… دایره المعارف پزشکی

واکنش تثبیت مکمل

واکنش تثبیت مکمل- (RSK)، یک آزمایش سرولوژیکی بسیار حساس و اختصاصی که برای تشخیص بسیاری از بیماری های عفونی و انگلی حیوانات استفاده می شود. از دو فاز متوالی تشکیل شده است. در مرحله اول آنتی ژن با سرم آزمایش مخلوط می شود و ... ... کشاورزی. فرهنگ لغت دایره المعارفی بزرگ

- (RSK؛ مترادف: واکنش Borde Zhangu، واکنش رد مکمل منسوخ، واکنش تثبیت الکسین منسوخ شده است.) یک روش تست سرولوژیکی بر اساس توانایی کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل برای اتصال به کمپلمان، که تشخیص داده می شود ... ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

واکنش پیوند مکمل (CFR)- بسیار حساس و خاص سرولوژیکی واکنش مورد استفاده برای تشخیص عفونی و بیماری های تهاجمی از دو متوالی تشکیل شده است فاز. در مرحله اول، آنتی ژن با سرم آزمایش و مکمل (مجموعه ای از پروتئین ها ... ...) مخلوط می شود. فرهنگ دایره المعارف کشاورزی

- (منسوخ شده) به واکنش تثبیت مکمل مراجعه کنید ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

واکنش رد مکمل- واکنش rus (g) تثبیت مکمل، واکنش (g) Borde Zhang. واکنش (g) انحراف مکمل. واکنش تثبیت الکسین (g) آزمون تثبیت مکمل fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa…… ایمنی و بهداشت شغلی. ترجمه به انگلیسی، فرانسوی، آلمانی، اسپانیایی

به واکنش تثبیت مکمل مراجعه کنید. (

واکنش تثبیت مکمل ، RSK، واکنش BordeGangu [به نام Belg. باکتری شناسان J. Bordet و O. Zhangu (O. Gengou)، 1901]، یک واکنش سرولوژیکی بسیار خاص و بسیار حساس بر اساس خاصیت کمپلکس آنتی ژنتی بادی برای تثبیت مکمل آزاد () که در تشخیص بسیاری از باکتری ها و ویروس ها استفاده می شود. برخی از بیماری های تک یاخته ای و کرمی، و همچنین برای مطالعه فرآیندهای همراه با تغییر در مقدار آنتی ژن یا آنتی بادی ها. CSC در 2 مرحله انجام می شود: 1) برهمکنش آنتی بادی ها، آنتی ژن و مکمل، در نتیجه مکمل آزاد توسط کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل (فاز خاص) متصل می شود. 2) نشانه واکنش حساس شده توسط گلبول های قرمز (فاز غیر اختصاصی). در RSC، 2 سیستم استفاده می شود: یک سیستم باکتریولوژیکی خاص، متشکل از یک آنتی بادی (سرم آزمایش)، آنتی ژن و مکمل، و همچنین یک سیستم "شاخص" غیر اختصاصی حاوی همولیزین (سرم همولیتیک) و یک سوسپانسیون گلبول های قرمز قوچ. یک آنتی ژن فقط در حضور مکمل به آنتی بادی متصل می شود. اگر سرم آزمایش حاوی آنتی بادی های همولوگ با آنتی ژن گرفته شده باشد، مکمل موجود در مخلوط واکنش دهنده توسط کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل جذب می شود و توانایی لیز گلبول های قرمز حساس را از دست می دهد، یعنی بدون مکمل، همولیزین (آنتی بادی همولیتیک) این کار را انجام می دهد. گلبول های قرمز را از بین نبرد (واکنش مثبت). در مواردی که رابطه خاصی بین آنتی ژن و آنتی بادی های سرم آزمایش وجود نداشته باشد، کمپلکس تشکیل نشده و مکمل در حالت آزاد باقی می ماند. هنگام افزودن یک سیستم همولیتیک در این مورد، مکمل غیر متصل باعث همولیز گلبول های قرمز حساس شده (واکنش منفی) می شود. گزینه های مختلفی برای مرحله بندی RSK وجود دارد: روش کلاسیک مرحله بندی به شکل ماکرو و ریز متغیرها، واکنش تثبیت مکمل طولانی مدت (RDSK) در سرما، روش RSK کمی با توجه به همولیز 50٪ گلبول های قرمز حساس، و غیره در عمل تشخیص دامپزشکی، روش کلاسیک RSK اغلب به شکل یک ماکرو واریانت استفاده می شود، که در آن هر جزء در 0.5 یا 0.25 میلی لیتر در یک تیتر کاری خاص گرفته می شود. کمپلمان در یک سیستم باکتریولوژیکی روی سرم‌های همان گونه جانوری که خون آن‌ها باید بررسی شود، تیتر می‌شود. سرم های آزمایش معمولاً در رقت های 1:5 و 1:10 با آنتی ژن و 1:5 بدون آنتی ژن (شاهد) بررسی می شوند. زمان اتصال مکمل در فاز خاص 20 دقیقه، زمان واکنش همولیز در فاز غیر اختصاصی 20 دقیقه در تی 3738 درجه سانتیگراد یک روش حساس تر، RDSC، برای تشخیص تعدادی از بیماری ها استفاده می شود. در این حالت، مرحله اول واکنش در ساعت انجام می شود تی 46 درجه سانتیگراد برای 1618 ساعت، که منجر به افزایش جذب کمپلمان توسط مقادیر کمی آنتی ژن و آنتی بادی می شود. سپس سیستم همولیتیک اضافه می شود و واکنش ادامه می یابد تی 3738 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه. نتایج RSK و RDSK با درجه تأخیر همولیز در نظر گرفته می شود که با ضربدر یا منفی نشان داده می شود که مربوط به درصدهای زیر همولیز گلبول قرمز است: ++++ از 0 تا 10٪. +++ از 10 تا 40 درصد؛ ++ از 40 تا 70 درصد؛ + 70 تا 90 درصد؛ 90 تا 100 درصد قانون دامپزشکی دستورالعمل های ویژه ای را برای تنظیم، ثبت و ارزیابی RSK و RDSK برای هر بیماری به طور جداگانه ارائه می کند.

ادبیات:
تحقیقات آزمایشگاهی در دامپزشکی، م.، 1971;
راهنمای ایمونولوژی، ویرایش. O. E. Vyazova و Sh. K. Khodzhaeva. مسکو، 1973.

فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی. - م.: "دایره المعارف شوروی". سردبیر V.P. شیشکوف. 1981 .

ببینید "" در فرهنگ های دیگر چیست:

واکنش تثبیت مکمل- (RSK) سرول. واکنشی که برای تعیین کمیت Ab و Ag تثبیت کننده مکمل استفاده می شود. اصل RSK این است که یک کمپلکس ایمنی خاص C اضافه شده به سیستم را به طور کامل یا جزئی جذب می کند. فرهنگ لغت میکروبیولوژی

واکنش تثبیت مکمل- I تست تثبیت مکمل یک آزمایش سرولوژیکی که برای تعیین آنتی ژن یا آنتی بادی استفاده می شود، بر اساس ارزیابی مصرف (پیوند) کمپلمان توسط کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی، به روش های تحقیق ایمونولوژیک مراجعه کنید. دوم…… دایره المعارف پزشکی

واکنش تثبیت مکمل- واکنش rus (g) تثبیت مکمل، واکنش (g) Borde Zhang. واکنش (g) انحراف مکمل. واکنش تثبیت الکسین (g) آزمون تثبیت مکمل fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa……

واکنش تثبیت مکمل- (RSK؛ مترادف: واکنش Borde Zhangu، واکنش رد مکمل منسوخ، واکنش تثبیت الکسین منسوخ شده است.) یک روش تست سرولوژیکی بر اساس توانایی کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل برای اتصال به کمپلمان، که تشخیص داده می شود ... ... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی- واکنش rus (g) تثبیت مکمل، واکنش (g) Borde Zhang. واکنش (g) انحراف مکمل. واکنش تثبیت الکسین (g) آزمون تثبیت مکمل fra réaction (f) de fixation du complément deu Komplementbindungsreaktion (f) spa…… ایمنی و بهداشت شغلی. ترجمه به انگلیسی، فرانسوی، آلمانی، اسپانیایی

واکنش اتصال مکمل- واکنش تثبیت مکمل را ببینید. (

که درواکنش بر اساس دو پدیده است - باکتریولیز و همولیز. متمم در تجلی آنها دخیل است. بنابراین، دو سیستم از اجزاء در RSC استفاده می شود: 1) پدیده باکتریولیز را فراهم می کند و برای اهداف تشخیصی استفاده می شود. 2) همولیتیک، شاخص، کمکی؛ به شما امکان می دهد تعیین کنید که آیا مکمل در سیستم اول محدود شده است یا نه (به طرح رنگ در شکل I مراجعه کنید). قبلاً از یک سوسپانسیون باکتری به عنوان آنتی ژن استفاده می شد، بنابراین اولین سیستم باکتریولیتیک نامیده می شد (در موارد مثبت، لیز باکتریایی رخ می داد).

تنظیم RSC در دو مرحله انجام می شود. در مرحله اول، یک سیستم باکتریولیتیک تهیه می شود: 0.5 میلی لیتر از سرم آزمایش با آنتی ژن در لوله های آزمایش مخلوط می شود، مکمل در یک دوز کاملاً تعریف شده (تیتر) اضافه می شود. مخلوط آنتی ژن - سرم - مکمل (سیستم باکتریولیتیک) در حمام آب (یا ترموستات) به مدت 20 ... 40 دقیقه در دمای 37 ... 38 "C نگهداری می شود. نتیجه برهمکنش اجزا در لوله آزمایش نامرئی است، مایع شفاف و بی رنگ می ماند برای تعیین، تماس اگر مکمل در سیستم باکتریولیتیک باشد، مرحله دوم واکنش انجام می شود: اجزای سیستم همولیتیک به لوله های آزمایش اضافه می شوند - گلبول های قرمز شسته شده گوسفند و سرم همولیتیک غیرفعال، همانطور که در طرح نشان داده شده است. تمام اجزای سیستم باکتریولیتیک برای مخلوط شدن در لوله آزمایش، در حمام آب در دمای 37...38 اینچ به مدت 20...40 دقیقه تکان داده می شوند. سپس اجزای سیستم گوهرشناسی اضافه می شود، همه چیز برای بار دوم تکان داده می شود و دوباره به مدت 10-15 دقیقه در یک حمام آب قرار می گیرد.

نتیجه اولیه اگر سرم از یک حیوان بیمار تهیه شود، آنگاه حاوی آنتی بادی هایی است که با یک آنتی ژن خاص ترکیب می شوند. مکمل به این مجموعه (آنتی ژن - آنتی بادی) متصل می شود - همولیز رخ نمی دهد، نتیجه مثبت است.

هیچ آنتی بادی در سرم حیوان سالم وجود ندارد: مجموعه آنتی ژن-آنتی بادی تشکیل نشده است، مکمل در سیستم باکتریولوژیک متصل نمی شود. هنگامی که گلبول های قرمز و همولیزین (این یک آنتی ژن و یک آنتی بادی است) اضافه می شود، مکمل با این کمپلکس واکنش نشان می دهد - همولیز رخ می دهد، نتیجه منفی است (نگاه کنید به رنگ شکل II).

گزارش نهایی نتیجه لوله ها به مدت 15 ... 20 ساعت در دمای اتاق قرار می گیرند.اگر سرم موجود در سیستم باکتریولیتیک از یک حیوان بیمار باشد، یک کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی خاص در لوله تشکیل می شود که تمام مکمل اضافه شده را جذب می کند (به هم متصل می کند). در نتیجه، در دوم، سیستم همولیتیک، همولیز رخ نخواهد داد، گلبول های قرمز در انتهای لوله قرار می گیرند، مایع رویی شفاف است. نتیجه RSC مثبت است.

اگر آنتی بادی خاصی برای آنتی ژن مورد استفاده در سرم آزمایش وجود نداشته باشد (در مواردی که سرم از حیوان سالم باشد)، کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی در سیستم باکتریولیتیک تشکیل نمی شود و بنابراین، مکمل در این سیستم تشکیل نمی شود. جذب می شود، اما رایگان باقی می ماند. هنگامی که اجزای سیستم همولیتیک اضافه می شوند (در مرحله دوم واکنش)، مکمل با کمپلکس دوم (همولیزین - گلبول های قرمز) تعامل می کند، همولیز گلبول های قرمز رخ می دهد - هیچ رسوبی تشکیل نمی شود، مایع داخل لوله آزمایش قرمز لاکی است. . نتیجه RSK منفی است.

RSK. استفاده: 1) برای تشخیص آنتی بادی های خاص در سرم یک حیوان بیمار (در تشخیص بروسلوز، پریپنومونی، غدد، لپتوسپیروز، تریپانوزومیازیس و غیره). 2) برای تشخیص یک آنتی ژن خاص (باکتری یا ویروسی) در ماده آزمایش در حضور سرم ایمنی خاص.

برای راه اندازی RSK، باید موارد زیر را داشته باشید: نمونه های سرمی دریافت شده برای تحقیق؛ دو سرم، مثبت شناخته شده (استاندارد، ارائه یک نتیجه مثبت)، و دو سرم طبیعی. همه سرم ها در رقت 1:10 در دمای 56...58 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شوند. آنتی ژن در رقت با توجه به تیتر. مکمل رقیق شده مطابق با تیتر تعیین شده در طی تیتراسیون در یک سیستم باکتریولیتیک. همولیزین در تیتر کاری؛ گلبول های قرمز قوچ (I: 40); سالین فیزیولوژیکی، پیپت های مدرج، لوله های آزمایش، قفسه ها، حمام آب در دمای 37...38 درجه سانتی گراد.

قبل از راه اندازی RSC، خون گوسفند دفیبرین می شود، گلبول های قرمز با سالین با سانتریفیوژ شسته می شوند تا مایع رویی کاملاً شفاف شود که با مکش خارج می شود و گلبول های قرمز رسوب شده در سالین 1:40 (2.5%) رقیق می شوند. آنتی ژن با توجه به تیتر نشان داده شده بر روی برچسب توسط کارخانه زیستی رقیق می شود. همولیزین و مکمل قبل از تنظیم RSK تیتر می شوند.

آنتی ژن برای CSC در کارخانه های زیستی تهیه می شود. معمولاً اینها عصاره های سوسپانسیون های میکروبی تخریب شده (یا بافت های حاوی ویروس) هستند. آنتی ژن ها نباید اثر همولیتیک داشته باشند، که در طول واکنش کنترل می شود (1 ... 2 دوز آنتی ژن و 0.5 میلی لیتر سوسپانسیون گلبول قرمز در یک لوله آزمایش ریخته می شود: نباید همولیز وجود داشته باشد). روی آمپول حاوی آنتی ژن، بیوفکتوری نشان می دهد که برای RSK (Sapny، بروسلوز یا موارد دیگر) در نظر گرفته شده است. جعبه بسته بندی شماره دسته، تاریخ ساخت، تاریخ انقضا، فعالیت آنتی ژن را نشان می دهد، یعنی در هنگام تنظیم RSK (1:100، 1:150 و غیره) در چه رقتی باید استفاده شود. در برخی بیماری ها، مواد دیگر به عنوان آنتی ژن عمل می کنند. به عنوان مثال، برای تشخیص پریپنومونی در گاو، آنتی ژن برای CSC، لنف گوساله ای است که به طور تجربی به صورت زیر جلدی یا داخل پلور آلوده شده است. با ذخیره طولانی مدت آنتی ژن ها، تیتر آنها دوباره در آزمایشگاه طبق یک طرح تیتراسیون ویژه بررسی می شود.

سرم های آزمایشی دریافت شده برای مطالعه با سالین 1: 5 یا 1: 10 رقیق می شوند، با حرارت دادن در حمام آب غیرفعال می شوند تا مکمل خود را به مدت 30 دقیقه در دمای 56 ... 58 اینچ از بین ببرند (سرم خرها، قاطرها، هندی ها - در 61 درجه سانتیگراد).

همولیزین در کارخانه‌های زیستی از طریق ایمن‌سازی خرگوش‌ها با گلبول‌های قرمز شسته شده قوچ تهیه می‌شود. برای انجام این کار، خرگوش ها به صورت داخل وریدی 4...5 بار در فواصل 2...3 روزه با سوسپانسیون 40...50 درصد گلبول های قرمز تزریق می شوند. یک هفته پس از آخرین تزریق، خون از خرگوش گرفته می شود، سرم به صورت استریل آسپیره می شود، غیرفعال می شود، با گلیسرول 1: 1 یا 0.5٪ فنل حفظ می شود، تیتر می شود، در آمپول ها ریخته می شود. در آزمایشگاه ها قبل از تنظیم RSK دوباره تیتر می شوند.

طرح تیتراسیون همولیزین.آماده کنید: i) رقت مکمل 1:20. 2) همولیزین 1:100 (0.2 میلی لیتر همولیزین + 9.8 میلی لیتر سالین)؛ 3) تعلیق گلبول های قرمز گوسفند 1:40; 4) محلول فیزیولوژیکی NaCl.

برای تنظیم واکنش تیتراسیون، دو ردیف لوله آزمایش در یک قفسه قرار می گیرند - یکی کمکی فقط برای تهیه رقت های همولیزین، دومی - برای تیتراسیون خود. رقت اولیه همولیزین 1:100 به لوله اول هر ردیف اضافه می شود و سپس یک رقت سریال ایجاد می شود. تمام لوله ها تکان داده می شوند و به مدت 10 ... 15 دقیقه در یک حمام آب در دمای 37...38 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. محاسبه نتیجه: در این مثال، کمترین مقدار (یا بالاترین رقت آن) که همولیز کامل کرد 1: 2000 است، یعنی این تیتر واقعی آن است. تیتر کار 2 برابر متمرکزتر است - 1:1000.

0.5 میلی لیتر (که با فلش نشان داده شده است) از هر رقت از لوله های آزمایش ردیف اول به لوله های آزمایش جداگانه ردیف دوم منتقل می شود. 0.5 میلی لیتر مکمل (1: 20)، 0.5 میلی لیتر گلبول قرمز قوچ (2.5٪ سوسپانسیون، یا 1:40) و 1 میلی لیتر سالین به تمام لوله های ردیف دوم اضافه کنید، به طوری که حجم مایع در هر ویال 2.5 باشد. میلی لیتر

توجه داشته باشید. با توجه به اینکه 5 جزء 0.5 میلی لیتری هر کدام در تنظیم نهایی RSC شرکت خواهند کرد که حجم 2.5 میلی لیتری را تشکیل می دهند، این حجم در کل کار رعایت می شود.

لوله ها تکان داده می شوند و به مدت 10-15 دقیقه در حمام آب قرار می گیرند. همولیز عمدتاً در لوله‌های آزمایش با محتوای همولیزین زیاد رخ می‌دهد (کوچکترین رقت آن 1: 500، 1: 1000 ... است). کمترین مقدار همولیزین (بیشترین رقت آن) که در این شرایط باعث همولیز کامل گلبول های قرمز می شود، نامیده می شود. تیتر محدود کننده (واقعی).همولیزین برای کار بیشتر، همولیزین 2 برابر غلیظ تر استفاده می شود، یعنی به مقدار دو برابر، یک تیتر دو برابر، که به نام عنوان شغل.برای مثال، اگر تیتر واقعی I:2500 (یا 1:2000) باشد، تیتر کاری مربوط به رقت 1:1250 (یا 1:W00) است.

مکمل بخشی جدایی ناپذیر از سرم تازه، لنف، مایعات بافتی گونه های مختلف حیوانی (و انسان) است. بوشنر (1889) کشف کرد. در حشرات، مکمل وجود ندارد. مکمل ماده ای پروتئینی، ساختار پیچیده ای است که به سرعت با حرارت دادن، نگهداری طولانی مدت، قرار گرفتن در معرض اشعه ماوراء بنفش، تکان دادن قوی، فیلتراسیون از طریق فیلترهای سرامیکی، افزودن کائولن، اسیدها، مواد قلیایی، الکل، استون، کلروفرم، مقطر غیرفعال می شود. آب، سوسپانسیون باکتری و غیره. مکمل را می توان با افزودن 5 گرم سولفات سدیم، 4 گرم اسید بوریک در هر 100 میلی لیتر سرم خوکچه هندی حفظ کرد. فعالیت مکمل تا شش ماه حفظ می شود. بهترین راه برای نگهداری خشک کردن در خلاء در دمای پایین (لیوفیلیزاسیون) است. در آمپول های مهر و موم شده در این حالت به مدت دو سال نگهداری می شود. قبل از هر تولید RSK، فعالیت مکمل با تیتراسیون بررسی می شود، یعنی تیتر آن تعیین می شود - مقدار بهینه مورد نیاز برای این واکنش. مکمل دو بار تیتر می شود: در سیستم های همولیتیک و باکتریولیتیک.

برای تیتراسیون مکمل در سیستم همولیتیکاجزای آماده شده: مکمل در رقت 1: 20 (1 میلی لیتر مکمل + 19 میلی لیتر نمک)؛ همولیزین، رقیق شده با توجه به تیتر کار؛ یک سوسپانسیون از گلبول های قرمز شسته شده گوسفند (1: 40)، سالین. لوله های آزمایش در یک سه پایه قرار می گیرند و مقادیر مختلف مکمل با پیپت مدرج در فواصل 0.03 میلی لیتر (0.13؛ 0.16؛ 0.19؛ 0.22 ..: تا 0.43 میلی لیتر) در آنها ریخته می شود. سپس اجزای باقی مانده را اضافه کنید (شکل 57). تمام لوله های آزمایش تکان داده می شوند و در حمام آب با دمای 37...38 اینچ به مدت 10...15 دقیقه قرار می گیرند و نتیجه ثبت می شود.

محاسبه نتیجه: کمترین مقدار مکملی که همولیز کامل را فراهم می کند (در این مثال 0.25 میلی لیتر) به عنوان تیتر مکمل در نظر گرفته می شود.

نتیجه تیتراسیون در لوله هایی با بالاترین محتوای مکمل در نظر گرفته می شود، جایی که قبل از هر چیز همولیز انتظار می رود. کمترین مقدار مکملی که در این شرایط همولیز کامل گلبول های قرمز را فراهم می کند نامیده می شود تیتر مکمل در سیستم همولیتیک

برای تیتراسیون مکمل در سیستم باکتریولیتیکوجود تمام اجزای واکنش ضروری است: مکمل (1:20)، گلبول های قرمز (1:40)، همولیزین در تیتر کار، دو سرم مثبت و دو سرم طبیعی، یک آنتی ژن خاص. سرم ها با سالین 1:10 رقیق شده و به مدت 30 دقیقه در دمای 56...58 X غیرفعال می شوند. هر سرم در دو ردیف لوله آزمایش 0.5 میلی لیتری ریخته می شود. مکمل به مقدار فزاینده ای به لوله های هر ردیف اضافه می شود، مانند تیتراسیون در یک سیستم همولیتیک. با مقدار مصرف شده به عنوان تیتر در سیستم همولیتیک شروع کنید، سپس در هر لوله آزمایش بعدی دوز 0.03 میلی لیتر افزایش می یابد و حجم آن با سالین به 0.5 میلی لیتر می رسد.

پس از آن 0.5 میلی لیتر آنتی ژن به یک ردیف لوله آزمایش با سرم های مثبت و نرمال و 0.5 میلی لیتر سالین به ردیف دوم هر سرم اضافه می شود. تمام لوله های آزمایش تکان داده می شوند و به مدت 30 تا 40 دقیقه در یک حمام آب قرار می گیرند. سپس 0.5 میلی لیتر همولیزین و 0.5 میلی لیتر گلبول قرمز به تمام لوله های آزمایش اضافه می شود، تکان داده می شود و به مدت 10-15 دقیقه در حمام آب قرار می گیرد. کمترین مقدار مکملی که لیز کامل گلبول های قرمز را در هر دو ردیف لوله (با آنتی ژن و بدون آنتی ژن) از دو سرم طبیعی، در یک ردیف (بدون آنتی ژن) از هر سرم مثبت و با تاخیر کامل (عدم) همولیز را تضمین کرد. ردیف های سرم مثبت با آنتی ژن (در آن دوزهای مشابه مکمل) نامیده می شود تیتر مکمل،که در فرمولاسیون تجربه اصلی RSC در مطالعات تشخیصی استفاده می شود.

تجربه اصلی RSC (مطالعه تشخیصی واقعی). دو ردیف لوله آزمایش با توجه به تعداد نمونه های سرم مورد مطالعه در قفسه ها قرار می گیرند. 0.5 میلی لیتر از هر سرم غیرفعال شده در دو لوله آزمایش ریخته می شود: یک آنتی ژن - 0.5 میلی لیتر به یکی اضافه می شود، 0.5 میلی لیتر محلول نمک به دیگری (بدون آنتی ژن) اضافه می شود، و با افزودن مکمل، یک سیستم باکتریالتیک را تشکیل می دهند. و سپس یک سیستم همولیتیک اضافه کنید.

اجزای مورد نیاز: 1) سرم آزمایش، غیر فعال، رقیق شده با سالین 1: 10. 2) یک آنتی ژن خاص رقیق شده با توجه به تیتر نشان داده شده توسط کارخانه زیستی روی برچسب بسته بندی. 3) مکمل در تیتر تعیین شده؛ 4) همولیزین در تیتر کار. 5) سوسپانسیون گلبول های قرمز شسته شده گوسفند 1: 40. 6) محلول نمک نمک نمک. سرم های آزمایش در دو ردیف لوله آزمایش ریخته می شوند. برای هر تعداد سرم آزمایش شده، از سرم های مثبت شناخته شده (که نتیجه مثبت می دهد) و سرم های نرمال (از یک حیوان سالم که نتیجه منفی می دهد) به عنوان شاهد استفاده می شود.

لوله ها با اجزای سیستم باکتریولیتیک تکان داده می شوند، در یک حمام آب به مدت 20...40 دقیقه در دمای 37...38 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. لوله های سیستم باکتریولیتیک ردیف دوم بدون آنتی ژن تکان داده می شوند و تحت شرایط مشابه در حمام آب قرار می گیرند.

سپس اجزای سیستم همولیتیک را به تمام لوله های آزمایش ردیف اول و دوم اضافه کرده و برای بار دوم به مدت 10..15 دقیقه در حمام آب قرار می دهند. در تمام لوله های ردیف دوم بدون آنتی ژن، همولیز کامل رخ می دهد.

تا حصول نتیجه نهایی، لوله ها را به مدت 18 ... در دمای اتاق می گذارند.

نشانه‌های واکنش در لوله‌های آزمایش با سرم‌های آزمایشی قابل اطمینان تلقی می‌شوند که در لوله‌های آزمایش با سرم و آنتی‌ژن مثبت، با همولیز کامل در لوله‌های آزمایش با سرم مثبت بدون آنتی‌ژن و در همه لوله‌های آزمایش با سرم طبیعی شناخته‌شده همولیز وجود نداشته باشد (شکل 1). 61).

این واکنش باید با کنترل آنتی ژن، مکمل، همولیزین، گلبول های قرمز همراه باشد. برای انجام این کار، آنتی ژن با گلبول های قرمز گوسفند در لوله های آزمایش جداگانه ریخته می شود. مکمل با گلبول های قرمز بدون همولیزین؛ همولیزین با گلبول های قرمز بدون مکمل؛ گلبول های قرمز و سالین حجم در هر لوله با سالین تا 2.5 میلی لیتر تنظیم می شود. لوله ها تکان داده می شوند و به مدت 20 دقیقه در حمام آب با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. تمام لوله های کنترل باید عاری از همولیز باشند.

نتیجه RSCمعمولاً به صورت ضربدری بیان می شود. شاخص های نتیجه مثبت واکنش: + + + + (///) - رسوب کامل گلبول های قرمز (بدون همولیز)، مایع بالای رسوب بی رنگ است، + + + (///) - مایع بالای رسوب به سختی به رنگ زرد است. نتیجه مشکوک واکنش: وجود گلبول های قرمز مستقر در کف و رنگ آمیزی جزئی مایع رویی به دلیل لیز قسمتی از گلبول های قرمز با + + - (++) نشان داده می شود، یعنی دو و دو و a. نیم صلیب همولیز واضح (بدون رسوب) یا با یک رسوب کوچک (+) یک نتیجه منفی است.

واکنش تثبیت طولانی مدت کمپلمان (RDSC).بر خلاف RSC کلاسیک معمولی، در حساسیت موثرتر است. ماهیت واکنش این است که سیستم باکتریولیتیک در سه شرایط دمایی مختلف نگهداری می شود: پس از مخلوط کردن اجزا در دمای اتاق به مدت 15 دقیقه، سپس در دمای پایین (4 درجه سانتیگراد) در یخچال به مدت 18 ... 20 ساعت و در یک حمام آب به مدت 15 دقیقه. پس از آن، سیستم همولیتیک اضافه می شود، تکان داده می شود، دوباره در یک حمام آب قرار می گیرد و واکنش ثبت می شود، مانند RSC. اثربخشی RDSC در تشخیص تعدادی از بیماری های عفونی (سل، ویبریوز، بروسلوز و غیره) تایید شده است.

واکنش سرکوب اتصال مکمل (RPSK)، یا واکنش مهار، RSK غیر مستقیم.جزء دیگر در این واکنش دخیل است - یک سرم ایمنی استاندارد حاوی آنتی بادی های آنتی ژنی که معمولاً برای تشخیص استفاده می شود و بنابراین در CSC کلاسیک واکنش مثبت نشان می دهد.

سرم آزمایش با آنتی ژن مخلوط شده و برای مدتی بدون مکمل نگهداری می شود. سپس مکمل و سرم استاندارد اضافه می شود، لوله ها تکان داده می شوند و به مدت 20 تا 30 دقیقه در یک حمام آب قرار می گیرند، پس از آن سیستم همولیتیک اضافه می شود و دوباره در حمام آب قرار می گیرد. اگر همولیز وجود نداشته باشد، نتیجه منفی است، زیرا سرم آزمایش با آنتی ژن واکنش نشان نداده و دومی با سرم استاندارد، مکمل متصل کننده واکنش نشان داده است. اگر سرم آزمایش از یک حیوان بیمار باشد، حاوی آنتی بادی های خاص در رابطه با آنتی ژن است، یعنی واکنشی بین آنتی ژن و آنتی بادی ها بدون اتصال مکمل رخ می دهد. آنتی ژن، در تعامل با آنتی بادی های سرم آزمایش، با سرم استاندارد (بدیهی خاص شناخته شده) واکنش نشان نمی دهد (سرکوب می شود)، مکمل آزاد می ماند و در سیستم همولیتیک واکنش نشان می دهد - همولیز رخ می دهد، نتیجه واکنش مثبت است. در رابطه با سرم آزمایش

روش آنتی بادی های فلورسنت (MFA).امکانات این روش به دلیل ویژگی فاز اول واکنش های سرولوژیکی با حساسیت بالای آنالیز لومینسانس است. برای اجرای MFA، داشتن سرم های شب تاب با ایمنی بالا ضروری است. مشخص است که آزمایش‌های سرولوژیکی مختلف که در عمل میکروبیولوژیکی مورد استفاده قرار می‌گیرند عمدتاً شامل سه جزء هستند: آنتی ژن باکتریایی، آنتی‌بادی و مکمل. هر سه جزء در واقع آنتی ژن هستند و سرم های ایمنی بدن و بر این اساس می توان آنتی بادی های شب تاب علیه هر یک از آنها به دست آورد. بسته به اینکه چه نوع سرم شب تاب استفاده می شود (علیه آنتی ژن باکتری، آنتی بادی های ضد باکتری، مکمل)، سه نوع اصلی روش آنتی بادی فلورسنت متمایز می شود: انواع مستقیم (1) و غیر مستقیم (2) و تغییر نوع غیر مستقیم با استفاده از مکمل. واکنش ایمونولوژیک بین آنتی ژن و آنتی بادی در این تغییرات مستقیماً روی لام شیشه ای انجام می شود. برای تثبیت میکروارگانیسم ها از حلال های آلی استفاده می شود: استون، اتانول، متانول، دی اکسان، و همچنین ثابت کننده های معمولی که در عمل میکروبیولوژیکی استفاده می شود: فرمالین، مخلوط نیکیفوروف، مایع کارنو و غیره.

گزینه مستقیم. یک سرم درخشان خاص برای مدت زمان معینی روی آماده سازی تمام شده اعمال می شود، سپس سرم اضافی تخلیه می شود، آماده سازی شسته می شود و در زیر میکروسکوپ فلورسنت مشاهده می شود. این روش برای تشخیص باکتری در مواد پاتولوژیک، اشیاء محیطی و همچنین شناسایی عوامل بیماری زا در فرهنگ ها استفاده می شود.

گزینه غیر مستقیم (دو مرحله ای). در مرحله اول، یک اتصال خاص آنتی ژن با آنتی بادی مربوطه سرم بدون برچسب رخ می دهد. در مرحله دوم، یک آنتی بادی بدون برچسب خاص به یک آنتی بادی شب تاب ضد گونه موجود در سرم حیوان ایمن شده با گلوبولین (یا سرم خون کامل) گونه حیوانی که از آن سرم ایمنی استفاده شده است، متصل می شود.

نوع غیرمستقیم ضد مکمل (سه مرحله ای). مرحله اول: تشکیل کمپلکس آنتی بادی بدون برچسب آنتی ژن. مرحله دوم: لایه بندی سرم معمولی حاوی مکمل. مرحله سوم: کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی-مکمل با سرم ضد مکمل شب تاب تهیه می شود که در طی ایمن سازی خرگوش ها با سرم گونه های حیوانی که به عنوان منبع مکمل عمل می کند، درمان می شود.

انواع غیرمستقیم MFA را می توان هم برای تشخیص آنتی ژن و هم برای تشخیص آنتی بادی استفاده کرد. علاوه بر این، برای راه‌اندازی یک نوع دو مرحله‌ای، باید مجموعه‌ای محدود از سرم‌های درخشان ضد گونه (در برابر گلوبولین‌های گاو، گوسفند، اسب، خوک و غیره) و برای یک نوع ضد مکمل، کافی است فقط یک سرم درخشان در برابر گلوبولین های خوکچه هندی داشته باشید.

تکنیک و ایمونولومینسانس و میکروسکوپ. در عمل آزمایشگاه های باکتریولوژیک دامپزشکی، از سرم های شب تاب تولید کارخانه های زیستی استفاده می شود. بسته به نوع فلوروکروم، سرم های شب تاب یا درخشش سبز جسم (یک رنگ مبتنی بر فلورسنت) یا یک درخشش قرمز (رنگ بر پایه رودامین) را ارائه می دهند.

برای انجام میکروسکوپ ایمونولومینسانس، ماده آزمایش باید روی یک لام شیشه ای بدون چربی، نازک و بدون خراش اعمال شود. در مطالعه اندام ها و بافت های حیوانات، آماده سازی-نقش در یک لایه نازک تهیه می شود. آماده سازی در هوا خشک می شود و در یک مایع ثابت قرار می گیرد (اتانول - 15 دقیقه، متانول - 5 دقیقه، استون - 5 دقیقه). در صورت لزوم، پس از تثبیت، آماده سازی می تواند برای مدتی در یخچال نگهداری شود. توالی و مراحل بعدی به نوع MFA مورد استفاده (تک مرحله ای، دو مرحله ای، سه مرحله ای) بستگی دارد. درمان فرآورده‌ها با سرم‌های درخشان، و همچنین سرم‌ها و مکمل‌های مرحله اول بدون برچسب، در 37 X در یک محفظه مرطوب (ظروف پتری با کاغذ صافی مرطوب شده) انجام می‌شود.

گزینه تک مرحله ایسرم لومینسنت روی یک اسلاید شیشه ای با یک ماده آزمایشی ثابت (در رقت نشان داده شده روی آمپول) اعمال می شود. دارو در یک محفظه مرطوب به مدت 15...20 دقیقه در دمای 37 اینچ قرار داده می شود. سپس با نمک بافر شده (pH 7.4) در ظرفی شسته می شود و محلول بعد از 5...10 دقیقه چندین بار یا کمتر از آن تغییر می کند. جاری شدن آب لوله کشی به مدت 3...5 دقیقه آب باید خنثی و فاقد آهن باشد. سپس آماده سازی (ممکن است چندین لکه روی یک لیوان وجود داشته باشد) در هوا یا کاغذ صافی خشک می شود و پس از آن یک قطره گلیسرول بافر با یک PH 8.0 اعمال شده و با یک لغزش پوششی پوشانده شده است.

گزینه دو مرحله اییک قطره از سرم بدون برچسب ایمنی مرحله اول روی یک لام شیشه ای با مواد آزمایشی اعمال می شود. این دارو در یک ترموستات در یک محفظه مرطوب به مدت 15 ... 20 دقیقه قرار می گیرد. سپس همانطور که در بالا توضیح داده شد، شسته می شود، خشک می شود و یک قطره سرم ضد گونه شب تاب زده می شود. دارو دوباره به مدت 15-20 دقیقه در یک ترموستات در یک محفظه مرطوب قرار می گیرد. روش شستشو را تکرار کنید و با کاغذ صافی خشک کنید. گلیسرول بافر اعمال می شود، با یک ورقه پوششی پوشانده می شود، یک مایع غوطه وری غیر فلورسنت اعمال می شود و میکروسکوپ می شود.

نوع سه مرحله ای (ضد مکمل).یک قطره از سرم بدون برچسب ایمنی مرحله اول روی یک لام شیشه ای با مواد آزمایشی اعمال می شود. دارو همانطور که در بالا توضیح داده شد در یک ترموستات قرار می گیرد، خشک می شود و یک قطره مکمل روی اسمیر قرار می گیرد. دارو دوباره در محفظه مرطوب و در ترموستات به مدت 15...20 دقیقه قرار داده می شود و پس از آن شسته می شود و سرم ضد مکمل شب تاب اعمال می شود. رویه های بعدی مشابه گزینه یک مرحله ای است.

تهیه و پردازش آماده سازی کنترل. 1. برای گزینه مستقیم، به منظور تعیین ویژگی واکنش بین آنتی ژن با سرم لومینسانس، آماده سازی اسمیر از گونه های میکروبی هترولوگ باید با همان سرم درمان شود. این گونه ها باید از نظر آنتی ژنی مشابه باشند، اما از نظر مورفولوژی با میکروارگانیسم های مورد مطالعه تفاوت دارند. از نظر ارتباط آنتی ژنی با میکروارگانیسم های مورد مطالعه فاصله دارد، اما از نظر مورفولوژی و توزیع با آنها مشابه است. آماده سازی چاپ با سرم معمولی درخشان درمان می شود.

2. برای واریانت غیرمستقیم، لازم است سه آماده سازی کنترل شده با سرم معمولی، سرم ضد گونه لومینسانس بدون سرم بدون برچسب ایمنی و سرم ضد گونه لومینسانس با سرم ایمنی شناخته شده مرحله اول درمان شده باشد.

3. برای گزینه غیر مستقیم با مکملآماده سازی های کنترلی مورد نیاز است که در طی پردازش آنها سرم ایمنی با سرم معمولی از همان نوع و در رقت های یکسان جایگزین می شود و همچنین آماده سازی هایی که با همه مواد به جز سرم ایمنی درمان شده اند.

ارزیابی نتایج. روشنایی، رنگ، محلی سازی و ساختار درخشش در نظر گرفته شده است. باکتری‌های رنگ‌آمیزی شده با سرم لومینسانس برچسب‌گذاری شده با ایزوتیوسیانات فلورسئین، در اطراف محیط به شکل لبه یا هاله درخششی سبز روشن دارند، قسمت مرکزی آن ضعیف می‌درخشد. چنین درخششی بر خلاف غیر اختصاصی، زمانی که کل بدن سلولی به طور یکنواخت می درخشد، خاص نامیده می شود. هر چه سلول باکتری در آماده سازی محدب تر باشد، لبه آن تیزتر است. این درخشش را می‌توان با این واقعیت توضیح داد که چندین برابر بیشتر آنتی‌بادی‌ها بر روی شبکیه چشم ناظر از یک منطقه از "محیط" سلول تا از قسمت مرکزی سلول میکروبی پخش می‌شود. باید در نظر داشت که سلول های پلاستیکی (لپتوسپیرا، ویبریوها) کانتور ندارند یا به سختی قابل توجه هستند. در سلول های غوطه ور در مایع بافتی و در باسیل های جوان سیاه زخم، کانتور معمولاً به وضوح بیان نمی شود.

شدت لومینسانس با توجه به سیستم چهار متقاطع ارزیابی می شود: + + + + - فلورسانس بسیار روشن در امتداد حاشیه سلول میکروبی، به وضوح با بدن تاریک سلول متضاد است. + + + - فلورسانس روشن پیرامون سلول. + + - درخشش ضعیف محیط سلول. + - بدون درخشش کنتراست محیطی بدن سلول میکروبی. عدم وجود درخشش خاص با "-" نشان داده می شود (سایه های میکروارگانیسم ها قابل مشاهده است). هنگام تشخیص پاتوژن های مختلف یک نتیجه مثبتاغلب، لومینسانس خاص سلول های باکتریایی کمتر از چهار یا سه تلاقی در نظر گرفته می شود.

کتاب درسی از هفت بخش تشکیل شده است. بخش اول - "میکروبیولوژی عمومی" - حاوی اطلاعاتی در مورد مورفولوژی و فیزیولوژی باکتری ها است. بخش دوم به ژنتیک باکتری ها اختصاص دارد. بخش سوم - "میکرو فلور بیوسفر" - میکرو فلور محیط، نقش آن در چرخه مواد در طبیعت، و همچنین میکرو فلور انسان و اهمیت آن را در نظر می گیرد. بخش چهارم - "دکترین عفونت" - به خواص بیماری زایی میکروارگانیسم ها، نقش آنها در فرآیند عفونی اختصاص دارد و همچنین حاوی اطلاعاتی در مورد آنتی بیوتیک ها و مکانیسم های عمل آنها است. بخش پنجم - "دکترین مصونیت" - حاوی ایده های مدرن در مورد مصونیت است. بخش ششم - "ویروس ها و بیماری هایی که ایجاد می کنند" - اطلاعاتی در مورد ویژگی های اصلی بیولوژیکی ویروس ها و بیماری هایی که آنها ایجاد می کنند ارائه می دهد. بخش هفتم - "میکروبیولوژی پزشکی خصوصی" - حاوی اطلاعاتی در مورد مورفولوژی، فیزیولوژی، خواص بیماری زایی پاتوژن های بسیاری است. بیماری های عفونی، و همچنین در مورد روش های مدرنتشخیص، پیشگیری و درمان خاص آنها.

این کتاب درسی برای دانشجویان، دانشجویان فارغ التحصیل و معلمان موسسات آموزش عالی پزشکی، دانشگاه ها، میکروب شناسان همه تخصص ها و پزشکان در نظر گرفته شده است.

ویرایش پنجم، بازبینی و بزرگ‌نمایی شده است

کتاب:

<<< Назад

جلو >>>

واکنش تثبیت مکمل

توانایی منحصر به فرد مکمل برای اتصال به طور خاص به کمپلکس های آنتی ژن + آنتی بادی با طبیعت متفاوت، کاربرد گسترده ای در واکنش تثبیت کمپلمان (CFR) پیدا کرده است. یک مزیت خاص CSC این است که ماهیت آنتی ژن درگیر در آن (جسمی یا محلول) مهم نیست، زیرا مکمل به قطعه Fc هر آنتی بادی مربوط به IgG و IgM بدون توجه به ویژگی آنتی بادی آن متصل می شود. علاوه بر این، CSC بسیار حساس است: به شما امکان می دهد مقدار آنتی بادی ها را 10 برابر کمتر از مثلاً در واکنش بارش شناسایی کنید. RSC در سال 1901 توسط J. Bordet و O. Zhang پیشنهاد شد. این بر اساس دو ویژگی مکمل است:

1) توانایی اتصال به مجموعه آنتی ژن + آنتی بادی؛

2) لیز گلبول های قرمز که برای به دست آوردن سرم همولیتیک استفاده می شود.

RSK در دو مرحله قرار می گیرد و به ترتیب دو سیستم در آن شرکت می کنند - آزمایشی یا تشخیصی و شاخص. سیستم تشخیصی شامل سرم آزمایشی (یا تشخیصی) است که در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه قبل از تنظیم واکنش برای غیرفعال کردن مکمل موجود در آن و آنتی ژن گرم می شود. یک مکمل استاندارد به این سیستم اضافه شده است. منبع آن آب پنیر تازه یا خشک شده خوکچه هندی است. مخلوط به مدت یک ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه می شود. اگر آنتی‌بادی‌هایی در سرم آزمایش وجود داشته باشد، با آنتی‌ژن اضافه‌شده برهم‌کنش می‌کنند و کمپلکس‌های آنتی‌ژن + آنتی‌بادی به‌دست‌آمده، مکمل اضافه‌شده را متصل می‌کنند. اگر آنتی بادی در سرم وجود نداشته باشد، تشکیل کمپلکس آنتی ژن + آنتی بادی رخ نمی دهد و مکمل آزاد می ماند. معمولاً هیچ تظاهرات قابل مشاهده ای از تثبیت کمپلمان در این مرحله از واکنش وجود ندارد. بنابراین، برای روشن شدن این سوال که آیا تثبیت کمپلمان رخ داده است یا خیر، یک سیستم نشانگر دوم (سرم همولیتیک غیرفعال + گلبول های قرمز قوچ) اضافه می شود و مخلوط تمام اجزای CSC دوباره در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30-60 دقیقه انکوبه می شود. پس از آن نتایج واکنش ارزیابی می شود. اگر مکمل در مرحله اول، در سیستم تشخیصی، یعنی آنتی بادی‌هایی در سرم بیمار وجود داشته باشد، و مکمل توسط کمپلکس آنتی‌بادی + آنتی‌ژن متصل شده باشد، لیز گلبول قرمز وجود نخواهد داشت - RSC مثبت است: مایع بی رنگ است، رسوب گلبول قرمز در پایین لوله است. اگر آنتی بادی خاصی در سرم وجود نداشته باشد و اتصال کمپلمان در سیستم تشخیصی رخ ندهد، یعنی RSK منفی باشد، مکمل مصرف نشده در سیستم تشخیصی به مجموعه گلبول های قرمز + آنتی بادی های سیستم نشانگر متصل می شود و همولیز رخ می دهد: در لوله آزمایش "خون لاک"، رسوب گلبول قرمز شماره. شدت CSC با یک سیستم چهار متقاطع، بسته به میزان تاخیر همولیز و وجود رسوب گلبول های قرمز، ارزیابی می شود. این واکنش با کنترل های مناسب همراه است: کنترل سرم (بدون آنتی ژن) و کنترل آنتی ژن (بدون سرم)، زیرا برخی از سرم ها و برخی آنتی ژن ها دارای اثرات ضد مکمل هستند. قبل از تنظیم RSK، تمام اجزای درگیر در آن، به استثنای سرم یا آنتی ژن مورد مطالعه، به دقت تیتر می شوند. به ویژه مهم است که دوز دقیق مکمل را وارد واکنش کنید، زیرا کمبود یا بیش از حد آن می تواند منجر به نتایج نادرست شود. تیتر کمپلمان حداقل مقداری است که در حضور دوز کاری سرم همولیتیک، انحلال کامل گلبول های قرمز را تضمین می کند. برای راه اندازی آزمایش اصلی، دوز مکمل گرفته می شود که 20-25٪ در مقایسه با تیتر تعیین شده افزایش یافته است. تیتر سرم همولیتیک حداکثر رقت آن است که در صورت مخلوط شدن با حجم مساوی از محلول مکمل 10 درصد، دوز مربوطه گلبول های قرمز خون را در مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد به طور کامل همولیز می کند. در آزمایش اصلی از سرم رقیق شده به 1/3 تیتر آن استفاده می شود.