सीएससी का एक विशेष लाभ यह है कि इसमें शामिल एंटीजन (कोरपसकुलर या घुलनशील) की प्रकृति कोई मायने नहीं रखती है, क्योंकि पूरक आईजीजी और आईजीएम से संबंधित किसी भी एंटीबॉडी के एफसी खंड को बांधता है, भले ही इसकी एंटीबॉडी विशिष्टता कुछ भी हो। इसके अलावा, सीएससी बहुत संवेदनशील है: यह 10 गुना कम एंटीबॉडी की मात्रा का पता लगाने की अनुमति देता है, उदाहरण के लिए, वर्षा प्रतिक्रिया में। आरएससी को 1901 में जे. बोर्डेट और ओ. झांग द्वारा प्रस्तावित किया गया था। यह पूरक के दो गुणों पर आधारित है:
1) "एंटीजन + एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स से जुड़ने की क्षमता;
2) हेमोलिटिक सीरम प्राप्त करने के लिए उपयोग किए जाने वाले एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण।
RSK को दो चरणों में रखा गया है, और क्रमशः दो प्रणालियाँ इसमें भाग लेती हैं - प्रायोगिक, या नैदानिक और संकेतक। डायग्नोस्टिक सिस्टम में टेस्ट (या डायग्नोस्टिक) सीरम होता है, जिसे प्रतिक्रिया से पहले 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया जाता है ताकि इसमें मौजूद पूरक और एंटीजन को निष्क्रिय किया जा सके।
इस प्रणाली में एक मानक पूरक जोड़ा जाता है। इसका स्रोत ताजा या सूखा गिनी पिग मट्ठा है। मिश्रण को एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। यदि परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी हैं, तो वे जोड़े गए एंटीजन के साथ बातचीत करेंगे, और परिणामी एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स अतिरिक्त पूरक को बांधेंगे। यदि सीरम में एंटीबॉडी नहीं हैं, तो एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का गठन नहीं होगा, और पूरक मुक्त रहेगा।
प्रतिक्रिया के इस स्तर पर आमतौर पर पूरक निर्धारण की कोई स्पष्ट अभिव्यक्ति नहीं होती है। इसलिए, पूरक निर्धारण हुआ है या नहीं, इस सवाल को स्पष्ट करने के लिए, एक दूसरा संकेतक सिस्टम (निष्क्रिय हेमोलिटिक सीरम + रैम एरिथ्रोसाइट्स) जोड़ा जाता है, और सभी सीएससी घटकों का मिश्रण 30-60 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर फिर से ऊष्मायन किया जाता है, जिसके बाद प्रतिक्रिया के परिणामों का मूल्यांकन किया जाता है। स्मार्टफोन (उदाहरण के लिए, ऐसे) का उपयोग करके, आप सटीक प्रतिक्रिया समय की गणना कर सकते हैं। यदि पूरक पहले चरण में डायग्नोस्टिक सिस्टम में बाध्य है, यानी रोगी के सीरम में एंटीबॉडी हैं, और पूरक "एंटीबॉडी + एंटीजन" कॉम्प्लेक्स द्वारा बाध्य किया गया है, तो एरिथ्रोसाइट्स का कोई विश्लेषण नहीं होगा - आरएससी सकारात्मक है : तरल रंगहीन है, तलछट टेस्ट ट्यूब एरिथ्रोसाइट्स के तल पर है।
यदि सीरम में कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं और डायग्नोस्टिक सिस्टम में पूरक बंधन नहीं होता है, यानी आरएसके नकारात्मक है, तो डायग्नोस्टिक सिस्टम में उपभोग नहीं किया गया पूरक संकेतक प्रणाली के "एरिथ्रोसाइट्स + एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स से जुड़ता है और हेमोलिसिस होता है : परखनली में "लाह रक्त", कोई एरिथ्रोसाइट तलछट नहीं। सीएससी की तीव्रता का मूल्यांकन चार-क्रॉस सिस्टम द्वारा किया जाता है, जो हेमोलिसिस विलंब की डिग्री और एरिथ्रोसाइट तलछट की उपस्थिति पर निर्भर करता है। प्रतिक्रिया उचित नियंत्रणों के साथ होती है: सीरम नियंत्रण (कोई प्रतिजन नहीं) और प्रतिजन नियंत्रण (कोई सीरम नहीं), क्योंकि कुछ सीरा और कुछ प्रतिजनों में प्रतिपूरक प्रभाव होते हैं। आरएसके स्थापित करने से पहले, इसमें शामिल सभी घटकों, अध्ययन किए गए सीरम या एंटीजन के अपवाद के साथ, सावधानीपूर्वक अनुमापन किया जाता है।
प्रतिक्रिया में पूरक की सटीक खुराक को पेश करना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, क्योंकि इसकी कमी या अधिकता से गलत परिणाम हो सकते हैं। पूरक अनुमापांक न्यूनतम राशि है, जो हेमोलिटिक सीरम की कार्यशील खुराक की उपस्थिति में, एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण विघटन को सुनिश्चित करता है। मुख्य प्रयोग को स्थापित करने के लिए, पूरक की एक खुराक ली जाती है, जो स्थापित अनुमापांक की तुलना में 20-25% बढ़ जाती है। हेमोलिटिक सीरम का टिटर इसकी अधिकतम कमजोर पड़ने वाला है, जो 10% पूरक समाधान के बराबर मात्रा में मिश्रित होने पर, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के भीतर एरिथ्रोसाइट्स की इसी खुराक को पूरी तरह से हेमोलाइज करता है।
विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए अप्रत्यक्ष हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का उपयोग त्वरित विधि के रूप में किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग एंटीजन के वाहक के रूप में किया जाता है। रोगी के सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति में, संवेदीकृत एरिथ्रोसाइट्स पूरक की उपस्थिति में lysed हैं।
सही जानकारी नहीं मिली? कोई बात नहीं! ऊपरी दाएं कोने में साइट खोज का उपयोग करें।
(आरएसके) - सेरोल। एक प्रतिक्रिया का उपयोग पूरक-फिक्सिंग एब और एजी को मापने के लिए किया जाता है। CSC का सिद्धांत यह है कि एक विशिष्ट प्रतिरक्षा परिसर पूरी तरह से या आंशिक रूप से C को सिस्टम में जोड़ा जाता है। C को C बाइंडिंग के मात्रात्मक संकेतक के रूप में लिया जाता है रक्तलायी प्रणाली,हेमोलिसिस एक झुंड निदान प्रणाली में एक प्रतिरक्षा परिसर की अनुपस्थिति को इंगित करता है (नकारात्मक आरएसके),हेमोलिसिस देरी - प्रतिरक्षा परिसर की उपस्थिति के लिए (सकारात्मक आरएसके)।आरएससी में, निम्नलिखित का उपयोग किया जाता है: 1) 30 मिनट के लिए 57 डिग्री सेल्सियस पर गरम किया जाता है। एस-कू, यह ताजा होना चाहिए, निलंबित कणों के बिना, साइटोटोक्सिन, सी। प्रयोग में, वे आमतौर पर संदिग्ध बीमारी में आरएसके के डायग्नोस्टिक टिटर के आधार पर एस-की के 2 कमजोर पड़ने के कई गुणकों को लेते हैं; 2) बिक्री के लिए निदान या आरएसके के लिए विशेष रूप से तैयार; 3) कार्यशील खुराक में C, जो Ag के साथ अनुमापित होने पर, C अनुमापांक के बराबर होता है, और जब Ag के बिना अनुमापन किया जाता है, तो यह C अनुमापांक से 20-25% अधिक होता है; 4) भेड़ एरिथ्रोसाइट्स को खारा से कई बार धोया जाता है और 3% निलंबन तैयार किया जाता है; 5) हेमोलिटिक एसिड लेबल पर संकेतित टिटर से 3 गुना कम पतला होता है। सभी 5 घटकों को एक ही मात्रा (0.5 मिली या 0.25 मिली) में लिया जाता है। अनुसंधान को प्रयोगात्मक (नैदानिक) प्रणाली में पेश किया जाता है। एस-कू, डायग्नोस्टिकम, एस। नियंत्रण तैयार किए जाते हैं: एस-की - एस-कू, सी और खारा समाधान (एजी के बजाय); डायग्नोस्टिकम - डायग्नोस्टिकम, सी और खारा समाधान (एस-की के बजाय); सी-सी और खारा की मात्रा दोगुनी; स्पष्ट रूप से सकारात्मक - मानक प्रतिरक्षा एस-का, एजी, सी; स्पष्ट रूप से नकारात्मक - सामान्य s-ka, Ar, C. नलियों को हिलाएं और 45 मिनट के लिए 37 ° C पर थर्मोस्टेट में रखें। साथ ही, भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक एस-की के 3% निलंबन के बराबर मात्रा मिलाकर एक हेमोलिटिक सिस्टम तैयार किया जाता है, और एक ही समय के लिए थर्मोस्टेट में लगाया जाता है। संवेदीकरण के बाद, सभी प्रायोगिक और नियंत्रण ट्यूबों में हेमोलिटिक सिस्टम (1 मिली या 0.5 मिली) की एक दोहरी मात्रा जोड़ी जाती है। नियंत्रण ट्यूबों (लगभग 30 - 40 मिनट) में पूर्ण हेमोलिसिस होने तक सभी ट्यूबों को 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टैट में रखा जाता है। प्रतिक्रिया को स्थापित करने की एक मात्रात्मक विधि के साथ, एक कमजोर पड़ने का पता चला है, क्रॉम में कम से कम 2+ (टिटर एट रिसर्च। एस-की) द्वारा हेमोलिसिस में देरी होती है और इसकी तुलना बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर से की जाती है। एस-की (आमतौर पर 1: 5) के एक कमजोर पड़ने के साथ अर्ध-मात्रात्मक विधि 4+, 3+, 2+ द्वारा हेमोलिसिस में देरी की डिग्री निर्धारित करना संभव बनाती है और इसके आधार पर प्रतिक्रिया की तीव्रता का मूल्यांकन करती है . अधिक सटीक परिणाम एस-की टिटर की खोज 100% नहीं, बल्कि 50% हेमोलिसिस (देखें। पूरक परिभाषा)।आरएसके की मात्रात्मक सेटिंग का एक प्रकार प्रस्तावित है, जिसमें एस-की का एक पतलापन लिया जाता है, लेकिन सी (1; 1.5; 2; 2.5; 3; 4) की कई खुराकें ली जाती हैं। अन्य सभी घटकों का समान मात्रा में उपयोग किया जाता है। मूल्यांकन करते समय इस तथ्य को ध्यान में रखें कि अधिक खुराक सी अध्ययन को बांधता है। एस-का, इसमें और अधिक।
(स्रोत: माइक्रोबायोलॉजी शर्तों की शब्दावली)
देखें कि "पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया" अन्य शब्दकोशों में क्या है:
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- आरएसके प्रयोगशाला पद्धति। [वैक्सीनोलॉजी और टीकाकरण पर बुनियादी शब्दों की अंग्रेजी-रूसी शब्दावली। विश्व स्वास्थ्य संगठन, 2009] विषय टीका विज्ञान, प्रतिरक्षण समानार्थक शब्द RSK EN पूरक निर्धारण परीक्षणCFTCF परीक्षण ... तकनीकी अनुवादक की पुस्तिका
पूरक संबंध प्रतिक्रिया- पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, RSK, BordeZhangu प्रतिक्रिया [नाम Belg। बैक्टीरियोलॉजिस्ट जे। बोर्डेट और ओ झांगू (ओ। गेंगौ), 1901], जटिल की संपत्ति के आधार पर एक अत्यधिक विशिष्ट और बहुत संवेदनशील सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया ... ... पशु चिकित्सा विश्वकोश शब्दकोश
I पूरक निर्धारण परीक्षण एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों द्वारा पूरक की खपत (बाध्यकारी) के आकलन के आधार पर एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाने वाला एक सीरोलॉजिकल परीक्षण, शोध के इम्यूनोलॉजिकल तरीके देखें। द्वितीय… … चिकित्सा विश्वकोश
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (RSK), एक अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट सीरोलॉजिकल परीक्षण जिसका उपयोग कई संक्रामक और परजीवी पशु रोगों के निदान के लिए किया जाता है। लगातार दो चरणों से मिलकर बनता है। पहले चरण में एंटीजन को टेस्ट सीरम के साथ मिलाया जाता है और ... ... कृषि. बड़ा विश्वकोश शब्दकोश
- (RSK; पर्यायवाची: बोर्ड झांगू प्रतिक्रिया, पूरक अस्वीकृति प्रतिक्रिया अप्रचलित, एलेक्सिन निर्धारण प्रतिक्रिया अप्रचलित।) परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की पूरक को बांधने की क्षमता के आधार पर एक सीरोलॉजिकल टेस्ट विधि, जिसका पता चला है ... ... बिग मेडिकल डिक्शनरी
पूरक संबंध प्रतिक्रिया (सीएफआर)- अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट। सीरम विज्ञानी निदान के लिए उपयोग की जाने वाली प्रतिक्रिया। संक्रामक और आक्रामक रोग। लगातार दो से मिलकर बनता है चरणों। पहले चरण में, प्रतिजन को परीक्षण सीरम और पूरक (प्रोटीन का एक जटिल ... ...) के साथ मिलाया जाता है। कृषि विश्वकोश शब्दकोश
- (अप्रचलित) पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया देखें ... बिग मेडिकल डिक्शनरी
पूरक अस्वीकृति प्रतिक्रिया- बोर्ड झांग के पूरक निर्धारण, प्रतिक्रिया (जी) की रस प्रतिक्रिया (जी); प्रतिक्रिया (छ) पूरक विचलन; एलेक्सिन फिक्सेशन रिएक्शन (g) eng कॉम्प्लीमेंट फिक्सेशन टेस्ट फ्रा रिएक्शन (f) डे फिक्सेशन डु कॉम्प्लीमेंट डे कॉम्प्लीमेंटबाइंडंगस्रेक्शन (f) स्पा... ... व्यावसायिक सुरक्षा और स्वास्थ्य। अंग्रेजी, फ्रेंच, जर्मन, स्पेनिश में अनुवाद
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया देखें। (
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया , आरएसके, बोर्डगंगू की प्रतिक्रिया [बेलग नाम। बैक्टीरियोलॉजिस्ट जे. बोर्डेट और ओ. झांगू (ओ. गेंगौ), 1901], नि: शुल्क पूरक () को ठीक करने के लिए एंटीजन्टीबॉडी कॉम्प्लेक्स की संपत्ति के आधार पर एक अत्यधिक विशिष्ट और बहुत संवेदनशील सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया, कई बैक्टीरिया और वायरल के निदान में उपयोग की जाती है और कुछ प्रोटोजोअल और हेल्मिंथिक रोग, साथ ही एंटीजन या एंटीबॉडी की मात्रा में बदलाव के साथ प्रक्रियाओं का अध्ययन करना। सीएससी 2 चरणों में आगे बढ़ता है: 1) एंटीबॉडी, एंटीजन और पूरक की बातचीत, जिसके परिणामस्वरूप मुक्त पूरक परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स (विशिष्ट चरण) से बंधे होते हैं; 2) एरिथ्रोसाइट्स (गैर-विशिष्ट चरण) द्वारा संवेदी प्रतिक्रिया का संकेत। RSC में, 2 प्रणालियों का उपयोग किया जाता है: एक विशिष्ट बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम, जिसमें एक एंटीबॉडी (टेस्ट सीरम), एंटीजन और पूरक, साथ ही एक गैर-विशिष्ट "संकेतक" सिस्टम होता है जिसमें हेमोलिसिन (हेमोलिटिक सीरम) और राम एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन होता है। एक प्रतिजन केवल पूरक की उपस्थिति में एक प्रतिरक्षी से बंधता है। यदि परीक्षण सीरम में लिए गए एंटीजन के समरूप एंटीबॉडी होते हैं, तो प्रतिक्रियात्मक मिश्रण में मौजूद पूरक परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स द्वारा सोख लिया जाता है और संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स को लाइसे करने की क्षमता खो देता है, अर्थात पूरक के बिना, हेमोलिसिन (हेमोलिटिक एंटीबॉडी) करता है एरिथ्रोसाइट्स (सकारात्मक प्रतिक्रिया) को नष्ट न करें। ऐसे मामलों में जहां परीक्षण सीरम के प्रतिजन और एंटीबॉडी के बीच कोई विशिष्ट संबंध नहीं है, जटिल नहीं बनता है और पूरक मुक्त अवस्था में रहता है। इस मामले में हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ते समय, अनबाउंड पूरक संवेदी लाल रक्त कोशिकाओं (नकारात्मक प्रतिक्रिया) के हेमोलिसिस का कारण बनता है। आरएसके के मंचन के लिए विभिन्न विकल्प हैं: मैक्रो- और माइक्रोवैरिएंट्स के रूप में मंचन की शास्त्रीय विधि, ठंड में दीर्घकालिक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (आरडीएसके), संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स के 50% हेमोलिसिस के अनुसार मात्रात्मक आरएसके की विधि, आदि। पशु चिकित्सा नैदानिक अभ्यास में, आरएसके की शास्त्रीय विधि का उपयोग अक्सर मैक्रो-वैरिएंट के रूप में किया जाता है, जिसमें प्रत्येक घटक को एक निश्चित कार्य अनुमापांक में 0.5 या 0.25 मिली में लिया जाता है। उसी पशु प्रजाति के सेरा पर बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम में सप्लीमेंट का शीर्षक दिया जाता है, जिसके रक्त की जांच की जानी है। टेस्ट सीरा की जांच आमतौर पर एंटीजन के साथ 1:5 और 1:10 और बिना एंटीजन (नियंत्रण) के 1:5 के घोल में की जाती है। विशिष्ट चरण 20 मिनट में पूरक बाध्यकारी समय, गैर-विशिष्ट चरण 20 मिनट में हेमोलिसिस प्रतिक्रिया समय टी 3738ºC। कई रोगों के निदान के लिए एक अधिक संवेदनशील विधि, RDSC का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, प्रतिक्रिया का पहला चरण किया जाता है टी 1618 घंटे के लिए 46ºC, जो एंटीजन और एंटीबॉडी की छोटी मात्रा द्वारा पूरक के सोखने की ओर जाता है। हेमोलिटिक सिस्टम तब जोड़ा जाता है और प्रतिक्रिया आगे बढ़ती है टी 3738ºC 20 मिनट के लिए। आरएसके और आरडीएसके के परिणामों को हेमोलिसिस देरी की डिग्री द्वारा ध्यान में रखा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट हेमोलिसिस के निम्नलिखित प्रतिशत के अनुरूप क्रॉस या माइनस द्वारा इंगित किया जाता है: ++++ 0 से 10% तक; +++ 10 से 40% तक; ++ 40 से 70% तक; + 70 से 90%; 90 से 100%। पशु चिकित्सा कानून प्रत्येक बीमारी के लिए अलग से आरएसके और आरडीएसके की स्थापना, रिकॉर्डिंग और मूल्यांकन के लिए विशेष निर्देश प्रदान करता है।
साहित्य:
पशु चिकित्सा में प्रयोगशाला शोध, एम।, 1971;
गाइड टू इम्यूनोलॉजी, एड। ओ. ई. व्याज़ोवा और श्री ख. खोद्ज़ेवा। मॉस्को, 1973।
पशु चिकित्सा विश्वकोश शब्दकोश। - एम .: "सोवियत विश्वकोश". मुख्य संपादकवी.पी. शिशकोव. 1981 .
अन्य शब्दकोशों में देखें "" क्या है:
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (आरएसके) सेरोल। एक प्रतिक्रिया का उपयोग पूरक-फिक्सिंग एब और एजी को मापने के लिए किया जाता है। आरएसके का सिद्धांत यह है कि एक विशिष्ट प्रतिरक्षा परिसर पूरी तरह से या आंशिक रूप से सिस्टम में जोड़े गए सी को सोख लेता है। जैसा ... ... सूक्ष्म जीव विज्ञान का शब्दकोश
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- आरएसके प्रयोगशाला पद्धति। [वैक्सीनोलॉजी और टीकाकरण पर बुनियादी शब्दों की अंग्रेजी-रूसी शब्दावली। विश्व स्वास्थ्य संगठन, 2009] विषय टीका विज्ञान, प्रतिरक्षण समानार्थक शब्द RSK EN पूरक निर्धारण परीक्षणCFTCF परीक्षण ... तकनीकी अनुवादक की पुस्तिका
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- I पूरक निर्धारण परीक्षण प्रतिजन-एंटीबॉडी परिसरों द्वारा पूरक की खपत (बाइंडिंग) के आकलन के आधार पर एंटीजन या एंटीबॉडी का निर्धारण करने के लिए उपयोग किया जाने वाला एक सीरोलॉजिकल परीक्षण, शोध के इम्यूनोलॉजिकल तरीके देखें। द्वितीय… … चिकित्सा विश्वकोश
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- बोर्ड झांग के पूरक निर्धारण, प्रतिक्रिया (जी) की रस प्रतिक्रिया (जी); प्रतिक्रिया (छ) पूरक विचलन; एलेक्सिन फिक्सेशन रिएक्शन (g) eng कॉम्प्लीमेंट फिक्सेशन टेस्ट फ्रा रिएक्शन (f) डे फिक्सेशन डु कॉम्प्लीमेंट डे कॉम्प्लीमेंटबाइंडंगस्रेक्शन (f) स्पा... ...
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (RSK), एक अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट सीरोलॉजिकल परीक्षण जिसका उपयोग कई संक्रामक और परजीवी पशु रोगों के निदान के लिए किया जाता है। लगातार दो चरणों से मिलकर बनता है। पहले चरण में एंटीजन को टेस्ट सीरम के साथ मिलाया जाता है और ... ... कृषि। बड़ा विश्वकोश शब्दकोश
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया- (RSK; पर्यायवाची: बोर्ड झांगू प्रतिक्रिया, पूरक अस्वीकृति प्रतिक्रिया अप्रचलित, एलेक्सिन निर्धारण प्रतिक्रिया अप्रचलित।) परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की पूरक को बांधने की क्षमता के आधार पर एक सीरोलॉजिकल टेस्ट विधि, जिसका पता चला है ... ... बिग मेडिकल डिक्शनरी- बोर्ड झांग के पूरक निर्धारण, प्रतिक्रिया (जी) की रस प्रतिक्रिया (जी); प्रतिक्रिया (छ) पूरक विचलन; एलेक्सिन फिक्सेशन रिएक्शन (g) eng कॉम्प्लीमेंट फिक्सेशन टेस्ट फ्रा रिएक्शन (f) डे फिक्सेशन डु कॉम्प्लीमेंट डे कॉम्प्लीमेंटबाइंडंगस्रेक्शन (f) स्पा... ... व्यावसायिक सुरक्षा और स्वास्थ्य। अंग्रेजी, फ्रेंच, जर्मन, स्पेनिश में अनुवाद
पूरक बाध्यकारी प्रतिक्रिया- पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया देखें। (
मेंप्रतिक्रिया दो घटनाओं पर आधारित है - बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस। पूरक उनकी अभिव्यक्ति में शामिल है। इसलिए, आरएससी में घटकों की दो प्रणालियों का उपयोग किया जाता है: 1) बैक्टीरियोलिसिस की घटना प्रदान करता है और नैदानिक उद्देश्यों के लिए उपयोग किया जाता है; 2) हेमोलिटिक, संकेतक, सहायक; आपको यह स्थापित करने की अनुमति देता है कि पूरक पहली प्रणाली में बाध्य है या नहीं (चित्र I में रंग योजना देखें)। पहले, बैक्टीरिया के एक निलंबन को एंटीजन के रूप में इस्तेमाल किया जाता था, इसलिए पहली प्रणाली को बैक्टीरियोलाइटिक कहा जाता था (सकारात्मक मामलों में, जीवाणु लसीका हुआ)।
आरएससी की सेटिंग दो चरणों में की जाती है। पहले चरण में, एक बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम तैयार किया जाता है: परीक्षण सीरम का 0.5 मिलीलीटर एंटीजन के साथ टेस्ट ट्यूब में मिलाया जाता है, पूरक को कड़ाई से परिभाषित खुराक (टिटर) में जोड़ा जाता है। एंटीजन - सीरम-पूरक (बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम) का मिश्रण 20 ... 40 मिनट के लिए 37 ... 38 "सी पर पानी के स्नान (या थर्मोस्टैट) में रखा जाता है। टेस्ट ट्यूब में घटकों की बातचीत का परिणाम अदृश्य है, तरल पारदर्शी और रंगहीन रहता है। यह निर्धारित करने के लिए संपर्क किया जाता है कि यदि पूरक बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम में है, तो प्रतिक्रिया का दूसरा चरण किया जाता है: हेमोलिटिक सिस्टम के घटकों को टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है - धोया भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और निष्क्रिय हेमोलिटिक सीरम, जैसा कि योजना में दिखाया गया है। बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम के सभी घटकों को परखनली में मिलाने के लिए हिलाया जाता है, 37 ... 38 "C पर 20... 40 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। फिर जेमोलॉजिकल सिस्टम के घटकों को जोड़ा जाता है, सब कुछ दूसरी बार हिलाया जाता है और फिर से 10-15 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है।
प्रारंभिक परिणाम। यदि किसी बीमार जानवर से सीरम प्राप्त किया जाता है, तो इसमें एंटीबॉडी होते हैं जो एक विशिष्ट एंटीजन के साथ संयोजन करते हैं। पूरक इस कॉम्प्लेक्स (एंटीजन - एंटीबॉडी) से जुड़ता है - हेमोलिसिस नहीं होता है, परिणाम सकारात्मक होता है।
एक स्वस्थ जानवर के सीरम में कोई एंटीबॉडी नहीं होते हैं: एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम में पूरक बांधता नहीं है। जब एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिसिन (यह एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी है) जोड़ा जाता है, तो पूरक इस परिसर के साथ प्रतिक्रिया करता है - हेमोलिसिस होगा, परिणाम नकारात्मक है (रंग देखें। II)।
परिणाम का अंतिम लेखा। ट्यूब को 15...20 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है। यदि बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम में सीरम एक बीमार जानवर से था, तो ट्यूब में एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, जो सभी अतिरिक्त पूरक को अवशोषित (बांधता) करता है। नतीजतन, दूसरे में, हेमोलिटिक, हेमोलिसिस सिस्टम नहीं होगा, एरिथ्रोसाइट्स ट्यूब के नीचे बस जाएंगे, सतह पर तैरनेवाला पारदर्शी है। आरएससी का परिणाम सकारात्मक है।
यदि परीक्षण सीरम में उपयोग किए जाने वाले एंटीजन के लिए कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं (उन मामलों में जहां सीरम एक स्वस्थ जानवर से है), एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम में नहीं बनता है और इसलिए, इस प्रणाली में पूरक नहीं है अवशोषित, लेकिन मुक्त रहता है। जब हेमोलिटिक सिस्टम के घटक जोड़े जाते हैं (प्रतिक्रिया के दूसरे चरण में), पूरक दूसरे कॉम्प्लेक्स (हेमोलिसिन - एरिथ्रोसाइट्स) के साथ इंटरैक्ट करता है, एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस होता है - कोई अवक्षेप नहीं बनता है, टेस्ट ट्यूब में तरल लाह लाल होता है . आरएसके का परिणाम नकारात्मक है।
आरएसके। उपयोग: 1) एक बीमार जानवर के सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए (ब्रुसेलोसिस, पेरिनिमोनिया, ग्लैंडर्स, लेप्टोस्पायरोसिस, ट्रिपैनोसोमियासिस, आदि के निदान में); 2) विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम की उपस्थिति में परीक्षण सामग्री में एक विशिष्ट एंटीजन (बैक्टीरिया या वायरल) का पता लगाने के लिए।
आरएसके स्थापित करने के लिए, आपके पास होना चाहिए: शोध के लिए प्राप्त सीरम के नमूने; दो सीरा, ज्ञात सकारात्मक (मानक, एक सकारात्मक परिणाम प्रदान करने वाला), और दो सामान्य सीरा। 1:10 तनुकरण में सभी सीरा 30 मिनट के लिए 56...58 °C पर निष्क्रिय कर दिए जाते हैं; अनुमापांक के अनुसार तनुकरण में प्रतिजन; एक बैक्टीरियोलाइटिक प्रणाली में अनुमापन के दौरान स्थापित अनुमापांक के अनुसार पतला पूरक; वर्किंग टिटर में हेमोलिसिन; राम एरिथ्रोसाइट्स (I: 40); शारीरिक खारा, अंशांकित पिपेट, टेस्ट ट्यूब, रैक, 37...38 डिग्री सेल्सियस पर पानी का स्नान।
आरएससी स्थापित करने से पहले, भेड़ के रक्त को डिफिब्रिनेटेड किया जाता है, एरिथ्रोसाइट्स को सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा खारा से धोया जाता है जब तक कि सतह पर तैरनेवाला पूरी तरह से पारदर्शी न हो, जिसे सक्शन द्वारा हटा दिया जाता है, और अवक्षेपित एरिथ्रोसाइट्स खारा 1:40 (2.5%) में पतला होता है। एंटीजन को बायोफैक्टरी द्वारा लेबल पर दर्शाए गए टिटर के अनुसार पतला किया जाता है। आरएसके सेट करने से पहले हेमोलिसिन और पूरक का शीर्षक दिया जाता है।
सीएससी के लिए एंटीजन जैव कारखानों में तैयार किया जाता है। आमतौर पर ये नष्ट किए गए माइक्रोबियल सस्पेंशन (या वायरस युक्त ऊतक) के अर्क होते हैं। एंटीजन में हेमोलिटिक प्रभाव नहीं होना चाहिए, जो प्रतिक्रिया के दौरान नियंत्रित होता है (एंटीजन की 1 ... 2 खुराक और एरिथ्रोसाइट निलंबन के 0.5 मिलीलीटर को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है: कोई हेमोलिसिस नहीं होना चाहिए)। प्रतिजन के साथ ampoule पर, बायोफैक्टरी इंगित करती है कि यह आरएसके (सपनी, ब्रुसेलोसिस या अन्य) के लिए अभिप्रेत है। पैकेजिंग बॉक्स बैच संख्या, निर्माण की तारीख, समाप्ति तिथि, प्रतिजन गतिविधि को इंगित करता है, यानी आरएसके (1: 100, 1: 150, आदि) सेट करते समय इसका उपयोग किस कमजोर पड़ने पर किया जाना चाहिए। कुछ रोगों में, अन्य पदार्थ एंटीजन के रूप में कार्य करते हैं; उदाहरण के लिए, मवेशियों में पेरिप्नेमोनिया के निदान के लिए, सीएससी के लिए प्रतिजन एक बछड़े का लसीका है जो प्रयोगात्मक रूप से चमड़े के नीचे या अंतःस्रावी रूप से संक्रमित होता है। प्रतिजनों के दीर्घकालिक भंडारण के साथ, विशेष अनुमापन योजना के अनुसार प्रयोगशाला में उनके अनुमापांक की फिर से जाँच की जाती है।
अध्ययन के लिए प्राप्त परीक्षण सीरा को खारा 1: 5 या 1: 10 के साथ पतला किया जाता है, पानी के स्नान में गर्म करके निष्क्रिय किया जाता है ताकि 56 ... 58 "सी (गधों, खच्चरों, हिन्नी का सीरा) के अपने स्वयं के पूरक को नष्ट किया जा सके। - 61 डिग्री सेल्सियस पर)।
धोए गए राम एरिथ्रोसाइट्स के साथ खरगोशों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा जैव-कारखानों में हेमोलिसिन तैयार किया जाता है। ऐसा करने के लिए, खरगोशों को 40...50% एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन के साथ 2...3 दिन के अंतराल पर 4...5 बार अंतःशिरा में इंजेक्ट किया जाता है। अंतिम इंजेक्शन के एक हफ्ते बाद, खरगोशों से रक्त लिया जाता है, सीरम को बाँझ रूप से एस्पिरेटेड, निष्क्रिय, ग्लिसरॉल 1: 1 या 0.5% फिनोल के साथ संरक्षित किया जाता है, शीर्षक दिया जाता है, ampoules में डाला जाता है। प्रयोगशालाओं में, आरएसके स्थापित करने से पहले, उन्हें फिर से टाइट किया जाता है।
हेमोलिसिन अनुमापन योजना।तैयार: i) पूरक कमजोर पड़ने 1:20; 2) हेमोलिसिन 1:100 (0.2 मिली हेमोलिसिन + 9.8 मिली खारा); 3) भेड़ एरिथ्रोसाइट्स 1:40 का निलंबन; 4) शारीरिक NaCl समाधान।
अनुमापन प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, टेस्ट ट्यूबों की दो पंक्तियों को एक रैक में रखा जाता है - एक सहायक केवल हेमोलिसिन के कमजोर पड़ने की तैयारी के लिए, दूसरा - स्वयं अनुमापन के लिए। हेमोलिसिन 1: 100 का प्रारंभिक कमजोर पड़ने को प्रत्येक पंक्ति की पहली ट्यूब में जोड़ा जाता है, और फिर एक धारावाहिक कमजोर पड़ने वाला बनाया जाता है। सभी नलियों को हिलाया जाता है और 37...38°C पर 10...15 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। परिणाम के लिए लेखांकन: इस उदाहरण में, सबसे छोटी राशि (या इसकी उच्चतम कमजोर पड़ने वाली) जिसने पूर्ण हेमोलाइसिस दिया वह 1: 2000 है, यानी यह इसका वास्तविक अनुमापांक है। काम करने वाला टिटर 2 गुना अधिक केंद्रित है - 1:1000।
पहली पंक्ति के टेस्ट ट्यूब से प्रत्येक कमजोर पड़ने के 0.5 मिलीलीटर (तीरों द्वारा इंगित) को दूसरी पंक्ति के अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है। पूरक के 0.5 मिलीलीटर (1: 20), राम एरिथ्रोसाइट्स के 0.5 मिलीलीटर (2.5% निलंबन, या 1: 40) और दूसरी पंक्ति के सभी ट्यूबों में 1 मिलीलीटर खारा जोड़ें, ताकि प्रत्येक शीशी में तरल की मात्रा 2.5 हो एमएल।
टिप्पणी। इस तथ्य के आधार पर कि प्रत्येक 0.5 मिली के 5 घटक आरएससी की अंतिम सेटिंग में भाग लेंगे, जो 2.5 मिली की मात्रा बनाएगा, यह मात्रा पूरे काम में देखी जाती है।
ट्यूबों को हिलाया जाता है और 10-15 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। हेमोलिसिस मुख्य रूप से टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिन की उच्च सामग्री के साथ होता है (इसकी सबसे छोटी कमजोर पड़ने वाली मात्रा 1: 500, 1: 1000 ...) है। हेमोलिसिन की सबसे छोटी मात्रा (इसका उच्चतम कमजोर पड़ना), जो इन स्थितियों के तहत एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण हेमोलिसिस का कारण बनती है, कहलाती है सीमित (वास्तविक) अनुमापांकहेमोलिसिन। आगे के काम के लिए, हेमोलिसिन का उपयोग 2 गुना अधिक केंद्रित होता है, यानी एक दोगुनी मात्रा में, एक डबल टिटर, जिसे कहा जाता है कार्य शीर्षक।उदाहरण के लिए, यदि वास्तविक टिटर I:2500 (या 1:2000) है, तो कार्यशील टिटर 1:1250 (या 1:W00) के कमजोर पड़ने के अनुरूप है।
पूरक ताजा सीरम, लसीका, विभिन्न जानवरों की प्रजातियों (और मनुष्यों) के ऊतक तरल पदार्थ का एक अभिन्न अंग है; बुचनर (1889) द्वारा खोजा गया। कीटों में पूरक अनुपस्थित होता है। पूरक एक प्रोटीन प्रकृति का एक पदार्थ है, एक जटिल संरचना का, हीटिंग, लंबे समय तक भंडारण, पराबैंगनी विकिरण के संपर्क में, मजबूत झटकों, सिरेमिक फिल्टर के माध्यम से निस्पंदन, काओलिन, एसिड, क्षार, शराब, एसीटोन, क्लोरोफॉर्म, डिस्टिल्ड द्वारा जल्दी से निष्क्रिय पानी, बैक्टीरिया का निलंबन आदि। पूरक को 5 ग्राम सोडियम सल्फेट, 4 ग्राम बोरिक एसिड प्रति 100 मिलीलीटर गिनी पिग सीरम में मिलाकर संरक्षित किया जा सकता है। पूरक गतिविधि को छह महीने तक बनाए रखा जाता है। संरक्षित करने का सबसे अच्छा तरीका कम तापमान (लाइओफिलाइजेशन) पर वैक्यूम के तहत सुखाना है। इस अवस्था में सीलबंद ampoules में, इसे दो साल तक संग्रहीत किया जाता है। आरएसके के प्रत्येक उत्पादन से पहले, अनुमापन द्वारा पूरक गतिविधि की जाँच की जाती है, अर्थात, इसका अनुमापांक निर्धारित किया जाता है - इस प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक इष्टतम राशि। पूरक को दो बार अनुमापित किया जाता है: हेमोलिटिक और बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम में।
के लिए हेमोलिटिक प्रणाली में पूरक अनुमापनघटक तैयार किए जाते हैं: 1: 20 के कमजोर पड़ने पर पूरक (पूरक का 1 मिली + खारा का 19 मिली); हेमोलिसिन, कार्यशील अनुमापांक के अनुसार पतला; धुली हुई भेड़ एरिथ्रोसाइट्स (1: 40), खारा का निलंबन। टेस्ट ट्यूब को एक तिपाई में रखा जाता है और 0.03 मिली (0.13; 0.16; 0.19; 0.22 ..: 0.43 मिली तक) के अंतराल पर स्नातक पिपेट के साथ अलग-अलग मात्रा में पूरक डाला जाता है। फिर शेष घटकों को जोड़ें (चित्र 57)। सभी परखनलियों को हिलाया जाता है और 37...38"C पर 10...15 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है और परिणाम रिकॉर्ड किया जाता है।
परिणाम के लिए लेखांकन: पूर्ण हेमोलिसिस प्रदान करने वाले पूरक की सबसे छोटी मात्रा (इस उदाहरण में, 0.25 मिली) को पूरक अनुमापांक के रूप में लिया जाता है।
उच्चतम पूरक सामग्री वाले ट्यूबों में अनुमापन के परिणाम को ध्यान में रखा जाता है, जहां सबसे पहले हेमोलिसिस की उम्मीद की जाती है। पूरक की सबसे छोटी मात्रा जो इन शर्तों के तहत एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण हेमोलिसिस प्रदान करती है, कहलाती है हेमोलिटिक सिस्टम में पूरक टिटर।
के लिए बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम में पूरक अनुमापनप्रतिक्रिया के सभी घटकों का होना आवश्यक है: पूरक (1:20), एरिथ्रोसाइट्स (1:40), काम करने वाले टिटर में हेमोलिसिन, दो सकारात्मक और दो सामान्य सीरा, एक विशिष्ट प्रतिजन। सेरा को 1:10 सेलाइन के साथ पतला किया जाता है, 56...58 X पर 30 मिनट के लिए निष्क्रिय किया जाता है। प्रत्येक सीरम को 0.5 मिली टेस्ट ट्यूब की दो पंक्तियों में डाला जाता है। पूरक प्रत्येक पंक्ति की नलियों में बढ़ती मात्रा में जोड़ा जाता है, जैसा कि हेमोलिटिक प्रणाली में अनुमापन में होता है; हेमोलिटिक सिस्टम में एक अनुमापांक के रूप में ली गई राशि से शुरू करें, फिर प्रत्येक बाद की टेस्ट ट्यूब में खुराक को 0.03 मिली तक बढ़ाया जाता है, मात्रा को खारा के साथ 0.5 मिली तक ले जाता है।
उसके बाद, सकारात्मक और सामान्य सीरा के साथ टेस्ट ट्यूबों की एक पंक्ति में 0.5 मिलीलीटर प्रतिजन जोड़ा जाता है, और प्रत्येक सीरम की दूसरी पंक्ति में 0.5 मिलीलीटर खारा जोड़ा जाता है। सभी परखनलियों को हिलाया जाता है और 30-40 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। फिर, 0.5 मिली हेमोलिसिन और 0.5 मिली एरिथ्रोसाइट्स को सभी टेस्ट ट्यूब में मिलाया जाता है, हिलाया जाता है और 10-15 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। पूरक की सबसे छोटी मात्रा जो प्रत्येक सकारात्मक सीरम की एक पंक्ति (एंटीजन के बिना) में और हेमोलिसिस की पूरी देरी (अनुपस्थिति) के साथ, दो सामान्य सीरा के ट्यूबों की दोनों पंक्तियों (एंटीजन के साथ और एंटीजन के बिना) में एरिथ्रोसाइट्स का पूर्ण लसीका सुनिश्चित करती है। प्रतिजन के साथ सकारात्मक सीरा की पंक्तियों (उनमें पूरक की समान खुराक) को कहा जाता है पूरक अनुमापांक,जिसका उपयोग नैदानिक अध्ययन में आरएससी के मुख्य अनुभव के निर्माण में किया जाता है।
आरएससी का मुख्य अनुभव (वास्तविक निदान अध्ययन)। अध्ययन के तहत सीरम के नमूनों की संख्या के अनुसार टेस्ट ट्यूब की दो पंक्तियों को रैक में रखा गया है। प्रत्येक निष्क्रिय सीरम का 0.5 मिली दो टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है: एक एंटीजन - 0.5 मिली को एक में मिलाया जाता है, 0.5 मिली खारा घोल को दूसरे (एंटीजन के बिना) में मिलाया जाता है, और, पूरक होने पर, वे एक बैक्टेरोलिटिक सिस्टम बनाते हैं, और फिर एक रक्तलायी प्रणाली जोड़ें।
आवश्यक घटक: 1) परीक्षण सीरम, निष्क्रिय, खारा 1: 10 के साथ पतला; 2) पैकेजिंग लेबल पर बायोफैक्टरी द्वारा इंगित टिटर के अनुसार पतला एक विशिष्ट प्रतिजन; 3) स्थापित अनुमापांक में पूरक; 4) वर्किंग टिटर में हीमोलिसिन; 5) धुली हुई भेड़ एरिथ्रोसाइट्स 1: 40 का निलंबन; 6) खारा NaCl समाधान। टेस्ट सेरा को टेस्ट ट्यूब की दो पंक्तियों में डाला जाता है। सीरा की किसी भी संख्या के परीक्षण के लिए, ज्ञात सकारात्मक सेरा (जो एक सकारात्मक परिणाम देता है) और सामान्य सीरा (एक स्वस्थ जानवर से, एक नकारात्मक परिणाम देता है) नियंत्रण के रूप में उपयोग किया जाता है।
बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम के घटकों के साथ ट्यूबों को हिलाया जाता है, 37...38 डिग्री सेल्सियस पर 20...40 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है। एंटीजन के बिना दूसरी पंक्ति के बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम की नलियों को हिलाया जाता है, उसी स्थिति में पानी के स्नान में रखा जाता है।
फिर, हेमोलिटिक प्रणाली के घटकों को पहली और दूसरी पंक्ति के सभी टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है, और 10..15 मिनट के लिए दूसरी बार पानी के स्नान में रखा जाता है। एंटीजन के बिना दूसरी पंक्ति की सभी ट्यूबों में, पूर्ण हेमोलिसिस होता है।
अंतिम परिणाम प्राप्त होने तक, ट्यूबों को कमरे के तापमान पर 18 ... के लिए छोड़ दिया जाता है।
टेस्ट सेरा के साथ टेस्ट ट्यूब में प्रतिक्रिया के संकेत विश्वसनीय माने जाते हैं यदि टेस्ट ट्यूब में पॉजिटिव सेरा और एंटीजन के साथ कोई हेमोलिसिस नहीं है, एंटीजन के बिना पॉजिटिव सीरम के साथ टेस्ट ट्यूब में पूर्ण हेमोलिसिस और ज्ञात सामान्य सीरम के साथ सभी टेस्ट ट्यूब में (चित्र। 61).
यह प्रतिक्रिया प्रतिजन, पूरक, हेमोलिसिन, एरिथ्रोसाइट्स के नियंत्रण के साथ होनी चाहिए। ऐसा करने के लिए, भेड़ एरिथ्रोसाइट्स वाले एंटीजन को अलग-अलग टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है; हेमोलिसिन के बिना एरिथ्रोसाइट्स के साथ पूरक; पूरक के बिना एरिथ्रोसाइट्स के साथ हेमोलिसिन; एरिथ्रोसाइट्स और खारा। प्रत्येक ट्यूब में मात्रा को खारा के साथ 2.5 मिली तक समायोजित किया जाता है। ट्यूबों को हिलाया जाता है और 20 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखा जाता है। सभी नियंत्रण ट्यूब हेमोलिसिस से मुक्त होने चाहिए।
आरएससी परिणामआमतौर पर क्रॉस में व्यक्त किया जाता है। प्रतिक्रिया के सकारात्मक परिणाम के संकेतक: + + + + (///) - एरिथ्रोसाइट्स का पूर्ण अवसादन (कोई हेमोलिसिस नहीं), तलछट के ऊपर का तरल रंगहीन है, + + + (///) - तलछट के ऊपर का तरल बमुश्किल प्रत्यक्ष रूप से पीले रंग का होता है। प्रतिक्रिया का संदिग्ध परिणाम: एरिथ्रोसाइट्स के कुछ हिस्से के लसीका के कारण सतह पर तैरनेवाला द्रव के नीचे और आंशिक धुंधलापन पर बसे एरिथ्रोसाइट्स की उपस्थिति को + + - (++) द्वारा निरूपित किया जाता है, अर्थात दो और दो और एक आधा पार। एक स्पष्ट हेमोलिसिस (तलछट के बिना) या एक छोटे तलछट (+) के साथ एक नकारात्मक परिणाम है।
दीर्घकालिक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (RDSC)।संवेदनशीलता में अधिक प्रभावी, सामान्य शास्त्रीय आरएससी के विपरीत। प्रतिक्रिया का सार यह है कि बैक्टीरियोलाइटिक सिस्टम को तीन अलग-अलग तापमान स्थितियों में रखा जाता है: 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर घटकों को मिलाने के बाद, फिर कम तापमान (4 डिग्री सेल्सियस) पर 18 ... 20 घंटे के लिए रेफ्रिजरेटर में और 15 मिनट के लिए पानी के स्नान में। उसके बाद, हेमोलिटिक सिस्टम को जोड़ा जाता है, हिलाया जाता है, फिर से पानी के स्नान में रखा जाता है, और आरएससी की तरह प्रतिक्रिया दर्ज की जाती है। कई संक्रामक रोगों (तपेदिक, वाइब्रोसिस, ब्रुसेलोसिस, आदि) के निदान में आरडीएससी की प्रभावशीलता की पुष्टि की गई है।
पूरक बंधन दमन प्रतिक्रिया (RPSK), या निषेध प्रतिक्रिया, अप्रत्यक्ष RSK।इस प्रतिक्रिया में एक अन्य घटक शामिल है - एक एंटीजन के लिए एंटीबॉडी युक्त एक मानक प्रतिरक्षा सीरम आमतौर पर निदान के लिए उपयोग किया जाता है और इसलिए, शास्त्रीय सीएससी में सकारात्मक प्रतिक्रिया करता है।
परीक्षण सीरम को एंटीजन के साथ मिलाया जाता है और बिना पूरक के कुछ समय के लिए रखा जाता है। फिर पूरक और मानक सीरम जोड़ा जाता है, ट्यूबों को हिलाया जाता है और 20...30 मिनट के लिए पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ा जाता है और पानी के स्नान में वापस डाल दिया जाता है। यदि कोई हेमोलिसिस नहीं है, तो परिणाम नकारात्मक है, क्योंकि परीक्षण सीरम ने प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया नहीं की और बाद वाले ने मानक सीरम, बाध्यकारी पूरक के साथ प्रतिक्रिया की। यदि परीक्षण सीरम एक बीमार जानवर से है, तो इसमें एंटीजन के संबंध में विशिष्ट एंटीबॉडी होते हैं, अर्थात, एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच पूरक बंधन के बिना एक प्रतिक्रिया होती है। प्रतिजन, परीक्षण सीरम के एंटीबॉडी के साथ बातचीत करता है, मानक (स्पष्ट रूप से ज्ञात विशिष्ट) सीरम के साथ प्रतिक्रिया नहीं करता है (दबाया जाता है), पूरक मुक्त रहता है और हेमोलिटिक प्रणाली में प्रतिक्रिया करता है - हेमोलिसिस होता है, प्रतिक्रिया का परिणाम सकारात्मक होता है परीक्षण सीरम के संबंध में।
तरीका फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (एमएफए)।इस पद्धति की संभावनाएं ल्यूमिनेसेंट विश्लेषण की उच्च संवेदनशीलता के साथ सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के पहले चरण की विशिष्टता के कारण हैं। एमएफए के कार्यान्वयन के लिए अत्यधिक विशिष्ट प्रतिरक्षा ल्यूमिनेसेंट सेरा का होना आवश्यक है। यह ज्ञात है कि सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में उपयोग किए जाने वाले विभिन्न सीरोलॉजिकल परीक्षणों में मुख्य रूप से तीन घटक शामिल होते हैं: बैक्टीरियल एंटीजन, एंटीबॉडी और पूरक। सभी तीन घटक, वास्तव में, एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरा हैं और, तदनुसार, उनमें से प्रत्येक के खिलाफ ल्यूमिनेसेंट एंटीबॉडी प्राप्त किए जा सकते हैं। किस प्रकार के ल्यूमिनेसेंट सीरम का उपयोग किया जाता है (जीवाणु प्रतिजन, जीवाणुरोधी एंटीबॉडी, पूरक के खिलाफ), फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि के तीन मुख्य रूपों को प्रतिष्ठित किया जाता है: प्रत्यक्ष (1) और अप्रत्यक्ष (2) संस्करण और पूरक का उपयोग करके अप्रत्यक्ष संस्करण का संशोधन। एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया इन संशोधनों में सीधे ग्लास स्लाइड पर की जाती है। सूक्ष्मजीवों को ठीक करने के लिए, कार्बनिक सॉल्वैंट्स का उपयोग किया जाता है: एसीटोन, इथेनॉल, मेथनॉल, डाइऑक्साइन, साथ ही सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में उपयोग किए जाने वाले पारंपरिक जुड़नार: फॉर्मेलिन, निकिफोरोव का मिश्रण, कार्नॉय का तरल, आदि।
सीधा विकल्प। एक निश्चित समय के लिए तैयार तैयारी के लिए एक विशिष्ट ल्यूमिनेसेंट सीरम लगाया जाता है, फिर अतिरिक्त सीरम निकाला जाता है, तैयारी धोया जाता है और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। इस पद्धति का उपयोग पैथोलॉजिकल सामग्री, पर्यावरणीय वस्तुओं के साथ-साथ संस्कृतियों में रोगजनकों की पहचान करने के लिए बैक्टीरिया का पता लगाने के लिए किया जाता है।
अप्रत्यक्ष (दो-चरण) विकल्प। पहले चरण में, बिना लेबल वाले सीरम के संबंधित एंटीबॉडी के साथ एंटीजन का एक विशिष्ट कनेक्शन होता है। दूसरे चरण में, एक विशिष्ट गैर-लेबल एंटीबॉडी एक जानवर के सीरम में निहित एक एंटी-प्रजाति ल्यूमिनसेंट एंटीबॉडी को बांधता है, जिसमें पशु प्रजातियों के ग्लोब्युलिन (या पूरे रक्त सीरम) से प्रतिरक्षित किया गया था, जिसमें से प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग किया गया था।
अप्रत्यक्ष प्रतिपूरक (तीन-चरण) संस्करण। पहला चरण: एंटीजन-अनलेबल्ड एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का गठन। दूसरा चरण: पूरक युक्त सामान्य सीरम की लेयरिंग। तीसरा चरण: एंटीजन-एंटीबॉडी-पूरक कॉम्प्लेक्स को खरगोशों के टीकाकरण के दौरान तैयार किए गए ल्यूमिनसेंट एंटी-पूरक सीरम के साथ जानवरों की प्रजातियों के सीरम के साथ इलाज किया जाता है जो पूरक के स्रोत के रूप में कार्य करता है।
अप्रत्यक्ष एमएफए वेरिएंट का उपयोग एंटीजन डिटेक्शन और एंटीबॉडी डिटेक्शन दोनों के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, दो-चरण संस्करण स्थापित करने के लिए, आपके पास एंटी-प्रजाति ल्यूमिनेसेंट सेरा (एक बैल, भेड़, घोड़े, सुअर, आदि के ग्लोब्युलिन के खिलाफ) का एक सीमित सेट होना चाहिए, और एक एंटी-पूरक संस्करण के लिए, गिनी पिग ग्लोबुलिन के खिलाफ केवल एक ल्यूमिनेसेंट सीरम होना पर्याप्त है।
तकनीक और इम्यूनोल्यूमिनिसेंस और माइक्रोस्कोपी। पशु चिकित्सा बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशालाओं के अभ्यास में, बायोफैक्टरी उत्पादन के ल्यूमिनसेंट सेरा का उपयोग किया जाता है। फ्लोरोक्रोम के प्रकार के आधार पर, ल्यूमिनेसेंट सीरा या तो वस्तु की हरी चमक (एक फ्लोरोसेंट-आधारित डाई) या एक लाल (एक रोडामाइन-आधारित डाई) प्रदान करता है।
इम्यूनोल्यूमिनेसेंट माइक्रोस्कोपी का संचालन करने के लिए, परीक्षण सामग्री को एक डीफैटेड, पतली, स्क्रैच-फ्री ग्लास स्लाइड पर लागू किया जाना चाहिए। जन्तुओं के अंगों तथा ऊतकों के अध्ययन में एक पतली परत में निर्मितियाँ-छापें तैयार की जाती हैं। तैयारी को हवा में सुखाया जाता है और एक फिक्सिंग तरल (इथेनॉल - 15 मिनट, मेथनॉल - 5 मिनट, एसीटोन - 5 मिनट) में रखा जाता है। यदि आवश्यक हो, फिक्सिंग के बाद, तैयारी कुछ समय के लिए रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत की जा सकती है। अनुक्रम और आगे की प्रक्रियाएं उपयोग किए गए एमएफए के प्रकार (एकल-चरण, दो-चरण, तीन-चरण) पर निर्भर करती हैं। ल्यूमिनेसेंट सेरा के साथ-साथ बिना लेबल वाले पहले चरण के सीरा और पूरक के साथ तैयारियों का उपचार एक आर्द्र कक्ष (नम फिल्टर पेपर के साथ पेट्री डिश) में 37 X पर किया जाता है।
एकल चरण विकल्प। Luminescent सीरम एक निश्चित परीक्षण सामग्री (ampoule पर इंगित कमजोर पड़ने में) के साथ एक ग्लास स्लाइड पर लागू होता है। दवा को 15...20 मिनट के लिए 37" सी पर एक आर्द्र कक्ष में रखा जाता है। फिर इसे एक बर्तन में बफर्ड खारा (पीएच 7.4) से धोया जाता है, 5...10 मिनट के बाद कई बार, या नीचे के घोल को बदलते हुए 3.5 मिनट के लिए नल का पानी न्यूट्रल और आयरन से मुक्त होना चाहिए। फिर तैयारी (एक गिलास पर कई स्मीयर हो सकते हैं) को हवा या फिल्टर पेपर में सुखाया जाता है, जिसके बाद बफर ग्लिसरॉल की एक बूंद के साथ 8.0 का पीएच लागू किया जाता है और एक कवर स्लिप के साथ कवर किया जाता है एक विसर्जन गैर-फ्लोरोसेंट तरल को कवरस्लिप और माइक्रोस्कोप पर लगाया जाता है।
दो चरण का विकल्प।परीक्षण सामग्री के साथ एक ग्लास स्लाइड पर पहले चरण के प्रतिरक्षा रहित सीरम की एक बूंद लगाई जाती है। दवा को थर्मोस्टेट में 15...20 मिनट के लिए नम कक्ष में रखा जाता है। फिर इसे ऊपर बताए अनुसार धोया जाता है, सुखाया जाता है और ल्यूमिनेसेंट एंटी-प्रजाति सीरम की एक बूंद लगाई जाती है। दवा को फिर से 15-20 मिनट के लिए एक आर्द्र कक्ष में थर्मोस्टेट में रखा जाता है। धोने की प्रक्रिया को दोहराएं और फिल्टर पेपर से सुखाएं। बफ़र्ड ग्लिसरॉल लगाया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, एक गैर-फ्लोरोसेंट विसर्जन तरल लगाया जाता है और माइक्रोस्कोप किया जाता है।
तीन-चरण संस्करण (एंटी-पूरक)।परीक्षण सामग्री के साथ एक ग्लास स्लाइड पर पहले चरण के प्रतिरक्षा रहित सीरम की एक बूंद लगाई जाती है। दवा को थर्मोस्टैट में रखा गया है, जैसा कि ऊपर वर्णित है, सूखे और पूरक की एक बूंद स्मीयर पर लागू होती है। दवा को फिर से एक आर्द्र कक्ष में और थर्मोस्टेट में 15...20 मिनट के लिए रखा जाता है, जिसके बाद इसे धोया जाता है और ल्यूमिनेसेंट एंटीकोम्प्लिमेंट्री सीरम लगाया जाता है। बाद की प्रक्रियाएं एक-चरण विकल्प के समान हैं।
नियंत्रण तैयारियों की तैयारी और प्रसंस्करण। 1. प्रत्यक्ष विकल्प के लिए, ल्यूमिनेसेंट सीरम के साथ एंटीजन के बीच प्रतिक्रिया की विशिष्टता निर्धारित करने के लिए, विषम माइक्रोबियल प्रजातियों से स्मीयर की तैयारी को उसी सीरम के साथ इलाज किया जाना चाहिए। इन प्रजातियों को एंटीजेनिक रूप से समान होना चाहिए, लेकिन अध्ययन किए गए सूक्ष्मजीवों से आकृति विज्ञान में भिन्न होना चाहिए; अध्ययन किए गए सूक्ष्मजीवों के एंटीजेनिक संबंध में दूर, लेकिन उनके साथ आकृति विज्ञान और वितरण में समान। छाप की तैयारी ल्यूमिनसेंट सामान्य सीरम के साथ इलाज की जाती है।
2. अप्रत्यक्ष संस्करण के लिए, पहले चरण के ज्ञात प्रतिरक्षा सीरम के साथ सामान्य सीरम, ल्यूमिनेसेंट एंटी-प्रजाति सीरम बिना इम्यून अनलेबल्ड सीरम और ल्यूमिनेसेंट एंटी-प्रजाति सीरम के साथ उपचारित तीन नियंत्रण तैयारियां होना आवश्यक है।
3. अप्रत्यक्ष विकल्प के लिए पूरक के साथनियंत्रण की तैयारी की आवश्यकता होती है, जिसके प्रसंस्करण के दौरान प्रतिरक्षा सीरम को उसी प्रकार के सामान्य सीरम से बदल दिया जाता है और साथ ही प्रतिरक्षा सीरम को छोड़कर सभी अवयवों के साथ तैयार की जाती है।
परिणामों का मूल्यांकन। चमक की चमक, रंग, स्थानीयकरण और संरचना को ध्यान में रखा जाता है। फ़्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट के साथ लेबल किए गए ल्यूमिनेसेंट सीरम से दागे गए बैक्टीरिया में रिम या हेलो के रूप में परिधि के चारों ओर एक चमकदार हरी चमक होती है, मध्य भाग कमजोर रूप से चमकता है। इस तरह की चमक को गैर-विशिष्ट के विपरीत विशिष्ट कहा जाता है, जब संपूर्ण कोशिका शरीर समान रूप से चमकता है। जीवाणु कोशिका जितनी अधिक उत्तल होती है, रिम उतनी ही तेज होती है। इस चमक को इस तथ्य से समझाया जा सकता है कि सूक्ष्म जीव कोशिका के मध्य भाग की तुलना में कोशिका के "परिधि" के एक इकाई क्षेत्र से पर्यवेक्षक के रेटिना पर कई गुना अधिक एंटीबॉडी का अनुमान लगाया जाता है। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि प्लास्टिक कोशिकाओं (लेप्टोस्पाइरा, विब्रियोस) में समोच्च नहीं होता है या यह मुश्किल से ध्यान देने योग्य होता है। ऊतक तरल पदार्थ और युवा एंथ्रेक्स बेसिली में डूबी कोशिकाओं में, समोच्च आमतौर पर तेजी से व्यक्त नहीं किया जाता है।
ल्यूमिनेसेंस तीव्रता का मूल्यांकन चार-क्रॉस सिस्टम के अनुसार किया जाता है: + + + + - माइक्रोबियल सेल की परिधि के साथ बहुत उज्ज्वल फ्लोरोसेंस, सेल के अंधेरे शरीर के साथ स्पष्ट रूप से विपरीत; + + + - कोशिका परिधि का उज्ज्वल प्रतिदीप्ति; + + - सेल परिधि की कमजोर चमक; + - माइक्रोबियल सेल बॉडी की परिधि की कोई विपरीत चमक नहीं। एक विशिष्ट चमक की अनुपस्थिति "-" द्वारा इंगित की जाती है (सूक्ष्मजीवों की छाया दिखाई देती है)। विभिन्न रोगजनकों का निदान करते समय एक सकारात्मक परिणामसबसे अधिक बार, जीवाणु कोशिकाओं की विशिष्ट ल्यूमिनेसेंस को चार या तीन क्रॉस से कम नहीं माना जाता है।
पाठ्यपुस्तक में सात भाग होते हैं। भाग एक - "जनरल माइक्रोबायोलॉजी" - बैक्टीरिया के आकारिकी और शरीर क्रिया विज्ञान के बारे में जानकारी शामिल है। भाग दो बैक्टीरिया के आनुवंशिकी के लिए समर्पित है। तीसरा भाग - "जीवमंडल का माइक्रोफ्लोरा" - पर्यावरण के माइक्रोफ्लोरा, प्रकृति में पदार्थों के चक्र में इसकी भूमिका, साथ ही मानव माइक्रोफ्लोरा और इसके महत्व पर विचार करता है। भाग चार - "संक्रमण का सिद्धांत" - सूक्ष्मजीवों के रोगजनक गुणों, संक्रामक प्रक्रिया में उनकी भूमिका के लिए समर्पित है, और इसमें एंटीबायोटिक दवाओं और उनकी क्रिया के तंत्र के बारे में जानकारी भी शामिल है। भाग पांच - "प्रतिरक्षा का सिद्धांत" - प्रतिरक्षा के बारे में आधुनिक विचार शामिल हैं। छठा भाग - "वायरस और उनके कारण होने वाली बीमारियाँ" - वायरस के मुख्य जैविक गुणों और उनसे होने वाली बीमारियों के बारे में जानकारी प्रदान करता है। भाग सात - "निजी चिकित्सा सूक्ष्म जीव विज्ञान" - कई के रोगजनकों के आकारिकी, शरीर विज्ञान, रोगजनक गुणों के बारे में जानकारी शामिल है संक्रामक रोग, साथ ही के बारे में आधुनिक तरीकेउनका निदान, विशिष्ट रोकथाम और चिकित्सा।
पाठ्यपुस्तक छात्रों, स्नातक छात्रों और उच्च चिकित्सा शिक्षण संस्थानों, विश्वविद्यालयों, सभी विशिष्टताओं और चिकित्सकों के सूक्ष्म जीवविज्ञानी के शिक्षकों के लिए अभिप्रेत है।
5वां संस्करण, संशोधित और विस्तृत
किताब:
| <<< Назад
|
आगे >>> |
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया
विभिन्न प्रकृति के प्रतिजन + एंटीबॉडी परिसरों को विशेष रूप से बाँधने की पूरक क्षमता को पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) में व्यापक आवेदन मिला है। सीएससी का एक विशेष लाभ यह है कि इसमें शामिल एंटीजन (कोरपसकुलर या घुलनशील) की प्रकृति कोई मायने नहीं रखती है, क्योंकि पूरक आईजीजी और आईजीएम से संबंधित किसी भी एंटीबॉडी के एफसी खंड को बांधता है, भले ही इसकी एंटीबॉडी विशिष्टता कुछ भी हो। इसके अलावा, सीएससी बहुत संवेदनशील है: यह 10 गुना कम एंटीबॉडी की मात्रा का पता लगाने की अनुमति देता है, उदाहरण के लिए, वर्षा प्रतिक्रिया में। आरएससी को 1901 में जे. बोर्डेट और ओ. झांग द्वारा प्रस्तावित किया गया था। यह पूरक के दो गुणों पर आधारित है:
1) एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से जुड़ने की क्षमता;
2) हेमोलिटिक सीरम प्राप्त करने के लिए उपयोग किए जाने वाले एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण।
RSK को दो चरणों में रखा गया है, और क्रमशः दो प्रणालियाँ इसमें भाग लेती हैं - प्रायोगिक, या नैदानिक और संकेतक। डायग्नोस्टिक सिस्टम में टेस्ट (या डायग्नोस्टिक) सीरम होता है, जिसे प्रतिक्रिया से पहले 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया जाता है ताकि इसमें मौजूद पूरक और एंटीजन को निष्क्रिय किया जा सके। इस प्रणाली में एक मानक पूरक जोड़ा जाता है। इसका स्रोत ताजा या सूखा गिनी पिग मट्ठा है। मिश्रण को एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। यदि परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी हैं, तो वे जोड़े गए एंटीजन के साथ बातचीत करेंगे, और परिणामी एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स अतिरिक्त पूरक को बांधेंगे। यदि सीरम में एंटीबॉडी नहीं हैं, तो एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का गठन नहीं होगा, और पूरक मुक्त रहेगा। प्रतिक्रिया के इस स्तर पर आमतौर पर पूरक निर्धारण की कोई स्पष्ट अभिव्यक्ति नहीं होती है। इसलिए, पूरक निर्धारण हुआ है या नहीं, इस सवाल को स्पष्ट करने के लिए, एक दूसरा संकेतक सिस्टम (निष्क्रिय हेमोलिटिक सीरम + रैम एरिथ्रोसाइट्स) जोड़ा जाता है, और सभी सीएससी घटकों का मिश्रण 30-60 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर फिर से ऊष्मायन किया जाता है। जिसके बाद प्रतिक्रिया के परिणामों का मूल्यांकन किया जाता है। यदि पूरक पहले चरण में डायग्नोस्टिक सिस्टम में बाध्य है, यानी रोगी के सीरम में एंटीबॉडी हैं, और पूरक एंटीबॉडी + एंटीजन कॉम्प्लेक्स द्वारा बाध्य किया गया है, तो कोई एरिथ्रोसाइट लिसिस नहीं होगा - आरएससी सकारात्मक है: तरल रंगहीन है, एरिथ्रोसाइट तलछट ट्यूब के तल पर है। यदि सीरम में कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं और डायग्नोस्टिक सिस्टम में सप्लीमेंट बाइंडिंग नहीं होती है, यानी आरएसके नेगेटिव है, तो डायग्नोस्टिक सिस्टम में इस्तेमाल नहीं किया गया सप्लीमेंट एरिथ्रोसाइट्स + इंडिकेटर सिस्टम के एंटीबॉडी के कॉम्प्लेक्स से जुड़ता है और हेमोलिसिस होता है: टेस्ट ट्यूब में "लाह रक्त", एरिथ्रोसाइट तलछट नं। सीएससी की तीव्रता का मूल्यांकन चार-क्रॉस सिस्टम द्वारा किया जाता है, जो हेमोलिसिस विलंब की डिग्री और एरिथ्रोसाइट तलछट की उपस्थिति पर निर्भर करता है। प्रतिक्रिया उचित नियंत्रणों के साथ होती है: सीरम नियंत्रण (कोई प्रतिजन नहीं) और प्रतिजन नियंत्रण (कोई सीरम नहीं), क्योंकि कुछ सीरा और कुछ प्रतिजनों में प्रतिपूरक प्रभाव होते हैं। आरएसके स्थापित करने से पहले, इसमें शामिल सभी घटकों, अध्ययन किए गए सीरम या एंटीजन के अपवाद के साथ, सावधानीपूर्वक अनुमापन किया जाता है। प्रतिक्रिया में पूरक की सटीक खुराक को पेश करना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, क्योंकि इसकी कमी या अधिकता से गलत परिणाम हो सकते हैं। पूरक अनुमापांक न्यूनतम राशि है, जो हेमोलिटिक सीरम की कार्यशील खुराक की उपस्थिति में, एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण विघटन को सुनिश्चित करता है। मुख्य प्रयोग की स्थापना के लिए, पूरक की एक खुराक ली जाती है, स्थापित अनुमापांक की तुलना में 20-25% की वृद्धि हुई। हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक इसका अधिकतम कमजोर पड़ना है, जो 10% पूरक समाधान के बराबर मात्रा में मिश्रित होने पर, 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के भीतर लाल रक्त कोशिकाओं की संबंधित खुराक को पूरी तरह से हेमोलाइज़ करता है। मुख्य प्रयोग में इसके टिटर के 1/3 तक पतला सीरम का उपयोग किया जाता है।